Cultura microbiológica - Microbiological culture
Uma cultura microbiológica , ou cultura microbiana , é um método de multiplicação de organismos microbianos, permitindo que se reproduzam em um meio de cultura predeterminado sob condições controladas de laboratório. As culturas microbianas são métodos diagnósticos básicos e fundamentais usados como uma ferramenta de pesquisa em biologia molecular .
As culturas microbianas são usadas para determinar o tipo de organismo, sua abundância na amostra testada ou ambos. É um dos principais métodos de diagnóstico da microbiologia e usado como ferramenta para determinar a causa de doenças infecciosas, permitindo que o agente se multiplique em um meio predeterminado. Por exemplo, uma cultura da garganta é obtida raspando o revestimento do tecido na parte de trás da garganta e transferindo a amostra para um meio para ser capaz de rastrear microorganismos prejudiciais, como Streptococcus pyogenes , o agente causador da infecção estreptocócica. Além disso, o termo cultura é mais geralmente usado informalmente para se referir ao "cultivo seletivo" de um tipo específico de microorganismo no laboratório.
Freqüentemente, é essencial isolar uma cultura pura de microorganismos. Uma cultura pura (ou axênica ) é uma população de células ou organismos multicelulares que crescem na ausência de outras espécies ou tipos. Uma cultura pura pode se originar de uma única célula ou organismo, caso em que as células são clones genéticos umas das outras. Para efeito de gelificação da cultura microbiana, utiliza-se o meio de gel de agarose ( ágar ). O ágar é uma substância gelatinosa derivada de algas marinhas . Um substituto barato para o ágar é a goma de guar , que pode ser usada para o isolamento e manutenção de termófilos .
Cultura bacteriana
Existem vários tipos de métodos de cultura bacteriana que são selecionados com base no agente que está sendo cultivado e o uso a jusante.
Culturas de caldo
Um método de cultura bacteriana é a cultura líquida, na qual as bactérias desejadas são suspensas em um meio nutriente líquido, como o caldo Luria , em um frasco vertical. Isso permite que um cientista desenvolva grandes quantidades de bactérias para uma variedade de aplicações posteriores.
As culturas líquidas são ideais para a preparação de um ensaio antimicrobiano no qual o experimentador inocula caldo líquido com bactérias e o deixa crescer durante a noite (eles podem usar um agitador para crescimento uniforme). Em seguida, eles pegariam alíquotas da amostra para testar a atividade antimicrobiana de uma droga ou proteína específica ( peptídeos antimicrobianos ).
Como alternativa, o microbiologista pode decidir usar culturas líquidas estáticas. Essas culturas não são agitadas e fornecem aos micróbios um gradiente de oxigênio.
Placas de ágar
As culturas microbiológicas podem ser cultivadas em placas de Petri de tamanhos diferentes que possuem uma camada fina de meio de crescimento à base de ágar. Uma vez que o meio de crescimento na placa de Petri é inoculado com a bactéria desejada, as placas são incubadas na temperatura ideal para o crescimento da bactéria selecionada (por exemplo, geralmente a 37 graus Celsius, ou a temperatura do corpo humano , para culturas de humanos ou animais, ou inferior para culturas ambientais). Depois que o nível desejado de crescimento é alcançado, as placas de ágar podem ser armazenadas de cabeça para baixo em um refrigerador por um longo período de tempo para manter as bactérias para experimentos futuros.
Há uma variedade de aditivos que podem ser adicionados ao ágar antes que ele seja colocado em uma placa e solidificado. Alguns tipos de bactérias só podem crescer na presença de certos aditivos. Isso também pode ser usado ao criar cepas de bactérias engenheiradas que contêm um gene de resistência a antibióticos . Quando o antibiótico selecionado é adicionado ao ágar, apenas as células bacterianas contendo a inserção do gene que confere resistência serão capazes de crescer. Isso permite ao pesquisador selecionar apenas as colônias que foram transformadas com sucesso.
Varetas à base de ágar
Versão miniaturizada de placas de ágar implementadas em formatos de vareta, por exemplo. Dip Slide , Digital Dipstick mostram potencial para ser usado no ponto de atendimento para fins de diagnóstico . Apresentam vantagens em relação às placas de ágar, pois são econômicas e sua operação não requer experiência ou ambiente de laboratório, o que permite que sejam utilizadas no local de atendimento.
Culturas de facadas
As culturas Stab são semelhantes às placas de ágar, mas são formadas por ágar sólido em um tubo de ensaio. As bactérias são introduzidas por meio de uma agulha de inoculação ou uma ponta de pipeta sendo perfurada no centro do ágar. As bactérias crescem na área puncionada. As culturas de facada são mais comumente usadas para armazenamento de curto prazo ou envio de culturas.
Coleções de cultura
As coleções de cultura microbiana se concentram na aquisição, autenticação, produção, preservação, catalogação e distribuição de culturas viáveis de microrganismos de referência padrão , linhas celulares e outros materiais para pesquisa em sistemática microbiana . A coleção de culturas também são repositórios de cepas de tipo .
Acrônimo da coleção | Nome | Localização |
---|---|---|
ATCC | American Type Culture Collection | Manassas , Virginia |
BCCM | Coleções de microrganismos coordenados da Bélgica | Célula de Coordenação Descentralizada em Bruxelas , Bélgica |
CCUG | Culture Collection Universidade de Gotemburgo | Gotemburgo, Suécia |
CECT | Colección Española de Cultivos Tipo | Valência, Espanha |
CIP | Collection d'Institut Pasteur | Paris , França |
DSMZ | Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen | Braunschweig , Alemanha |
ICMP | Coleção Internacional de Microorganismos de Plantas | Auckland , Nova Zelândia |
JCM | Coleção Japonesa de Microorganismos | Tsukuba, Ibaraki , Japão |
NCTC | Coleção Nacional de Culturas Tipo | Public Health England , Londres , Reino Unido |
NCIMB | Coleção Nacional de Bactérias Industriais, Alimentares e Marinhas | Aberdeen , Escócia |
Cultura de placa sólida de microrganismos termofílicos
Para culturas de placa sólida de microrganismos termofílicos, como Bacillus acidocaldarius, Bacillus stearothermophilus, Thermus aquaticus e Thermus thermophilus etc. crescendo a temperaturas de 50 a 70 graus C, a goma de gel clarificada com baixo acil provou ser o agente gelificante preferido em comparação com o ágar para a contagem ou isolamento ou ambos das bactérias termofílicas acima.
Cultura de vírus e fago
As culturas de vírus ou fago requerem células hospedeiras nas quais o vírus ou fago se multiplique. Para bacteriófagos , as culturas são cultivadas infectando células bacterianas. O fago pode então ser isolado das placas resultantes em um gramado de bactérias em uma placa. As culturas de vírus são obtidas a partir de suas células hospedeiras eucarióticas apropriadas. O método da placa em faixa é uma forma de separar fisicamente a população microbiana e é feito espalhando o inoculado para frente e para trás com uma alça de inoculação sobre a placa de ágar sólido. Após a incubação, as colônias irão surgir e células únicas terão sido isoladas da biomassa. Uma vez que um microrganismo tenha sido isolado em cultura pura, é necessário preservá-lo em um estado viável para posterior estudo e uso. As culturas conservadas em estoque devem ser mantidas, de forma que não haja perda de seus caracteres biológicos, imunológicos e culturais.
Cultura de células eucarióticas
Isolamento de culturas puras
Para eucariotos unicelulares, como leveduras, o isolamento de culturas puras usa as mesmas técnicas das culturas bacterianas. As culturas puras de organismos multicelulares são frequentemente mais facilmente isoladas simplesmente escolhendo um único indivíduo para iniciar uma cultura. Esta é uma técnica útil para a cultura pura de fungos , algas multicelulares e pequenos metazoários , por exemplo.
O desenvolvimento de técnicas de cultura pura é fundamental para a observação do espécime em questão. O método mais comum para isolar células individuais e produzir uma cultura pura é preparar uma placa de streak. O método da placa em faixa é uma forma de separar fisicamente a população microbiana e é feito espalhando o inoculado para frente e para trás com uma alça de inoculação sobre a placa de ágar sólido . Após a incubação, as colônias irão surgir e células únicas terão sido isoladas da biomassa. Uma vez que um microrganismo tenha sido isolado em cultura pura, é necessário preservá-lo em um estado viável para posterior estudo e uso. As culturas conservadas em estoque devem ser mantidas, de forma que não haja perda de seus caracteres biológicos, imunológicos e culturais.
Veja também
- Unidade formadora de colônia
- Cultura de sangue
- Matéria escura microbiana
- Culturas Microbianas de Alimentos
- Culturas de triagem
- Cultura de escarro
- Cultura síncrona
- Goma gelana
Referências
links externos
- EFFCA - European Food and Feed Cultutes Association. Informações sobre produção e uso de culturas microbianas, bem como aspectos legislativos.