Diferencial de glóbulos brancos - White blood cell differential

Diferencial de leucócitos
Neutrófilos (à esquerda) e linfócitos (à direita) vistos microscopicamente em um esfregaço de sangue
Sinônimos	Contagem diferencial de leucócitos, leucograma, autodiff, diff manual
Objetivo	Descrever populações de glóbulos brancos no sangue periférico
MedlinePlus	003657
eMedicine	2085133
LOINC	33255-1 , 24318-8 , 69738-3

Um diferencial de glóbulos brancos é um teste de laboratório médico que fornece informações sobre os tipos e quantidades de glóbulos brancos no sangue de uma pessoa. O teste, que geralmente é solicitado como parte de um hemograma completo (CBC), mede as quantidades dos cinco tipos normais de glóbulos brancos - neutrófilos , linfócitos , monócitos , eosinófilos e basófilos  - bem como tipos de células anormais, se estiverem presentes . Esses resultados são relatados como porcentagens e valores absolutos e comparados com os intervalos de referência para determinar se os valores são normais, baixos ou altos. As alterações nas quantidades de glóbulos brancos podem ajudar no diagnóstico de muitas condições de saúde, incluindo infecções virais , bacterianas e parasitárias e doenças do sangue , como leucemia .

Diferenciais de leucócitos podem ser realizados por um analisador automatizado  - uma máquina projetada para executar testes de laboratório - ou manualmente, examinando esfregaços de sangue em um microscópio. O teste foi realizado manualmente até que os analisadores diferenciais de leucócitos fossem introduzidos na década de 1970, tornando possível o diferencial automatizado . No diferencial automatizado, uma amostra de sangue é carregada em um analisador, que coleta uma amostra de um pequeno volume de sangue e mede várias propriedades dos glóbulos brancos para produzir uma contagem diferencial. O diferencial manual , no qual os glóbulos brancos são contados em uma lâmina de microscópio tingida , agora é realizado para investigar resultados anormais do diferencial automatizado ou mediante solicitação do provedor de saúde. O diferencial manual pode identificar tipos de células que não são contados por métodos automatizados e detectar alterações clinicamente significativas na aparência dos glóbulos brancos.

Em 1674, Antonie van Leeuwenhoek publicou as primeiras observações microscópicas de células sanguíneas. Os avanços na tecnologia do microscópio ao longo dos séculos 18 e 19 permitiram que os três componentes celulares do sangue fossem identificados e contados. Na década de 1870, Paul Ehrlich inventou uma técnica de coloração que poderia diferenciar cada tipo de glóbulo branco. Dmitri Leonidovich Romanowsky mais tarde modificou a mancha de Ehrlich para produzir uma gama mais ampla de cores, criando a mancha de Romanowsky , que ainda é usada para manchar manchas de sangue para diferenciais manuais.

A automação do diferencial de leucócitos começou com a invenção do contador Coulter , o primeiro analisador hematológico automatizado , no início dos anos 1950. Essa máquina usava medições de impedância elétrica para contar as células e determinar seus tamanhos, permitindo que os glóbulos brancos e vermelhos fossem enumerados. Na década de 1970, duas técnicas foram desenvolvidas para realizar contagens diferenciais automatizadas: processamento digital de imagens de lâminas de microscópio e técnicas de citometria de fluxo usando espalhamento de luz e coloração de células. Esses métodos permanecem em uso em analisadores hematológicos modernos.

Usos médicos

O diferencial de leucócitos é um exame de sangue comum que costuma ser solicitado junto com um hemograma completo . O teste pode ser realizado como parte de um exame médico de rotina ; para investigar certos sintomas, particularmente aqueles sugestivos de infecção ou distúrbios hematológicos ; ou para monitorar condições existentes, como distúrbios do sangue e doenças inflamatórias.

Cinco tipos de glóbulos brancos são normalmente encontrados no sangue: neutrófilos , linfócitos , monócitos , eosinófilos e basófilos . Mudanças marcadas nas proporções desses tipos de células, conforme medido pelo diferencial automático ou manual, podem indicar várias condições de saúde. Além disso, os tipos de células que normalmente não ocorrem no sangue, como as células blásticas , podem ser identificados pelo diferencial manual. Esses tipos de células podem ser encontrados em doenças do sangue e outros estados patológicos. O diferencial manual também pode identificar alterações na aparência de leucócitos, como linfócitos reativos , ou características como granulação tóxica e vacuolização em neutrófilos. Os resultados do diferencial de glóbulos brancos são apresentados como percentagens e valores absolutos. As contagens absolutas são geralmente apresentados em unidades de células por microlitro (uL) ou 10 ⁹ culas por litro (L). Os resultados são então comparados com os intervalos de referência , que são definidos por laboratórios individuais e podem variar devido a diferentes populações de pacientes e métodos de teste.

O hemograma completo e o teste diferencial geralmente são realizados em sangue venoso ou capilar . A coleta de sangue capilar é geralmente usada para bebês e indivíduos cujas veias são de difícil acesso. Para evitar a coagulação , a amostra é retirada para um tubo contendo o composto anticoagulante ácido etilenodiaminotetracético (EDTA). Os tubos contendo citrato de sódio podem ser para pacientes nos quais o EDTA causa aglomeração de plaquetas . O teste é realizado em sangue total, ou seja, sangue que não foi centrifugado .

Tipos

Diferencial manual

A técnica diferencial manual permite que as células sejam classificadas com base em mudanças sutis na aparência, como nesses linfócitos reativos vistos em uma pessoa com mononucleose infecciosa .

Em um diferencial manual, um esfregaço de sangue corado é examinado ao microscópio e os leucócitos são contados e classificados com base em sua aparência. Um diferencial manual geralmente é executado quando o diferencial automatizado é sinalizado para revisão ou quando o provedor de saúde o solicita. Se o diferencial manual mostrar achados sugestivos de certas condições graves, como leucemia, o esfregaço de sangue é encaminhado a um médico (geralmente um hematologista ou patologista ) para confirmação.

Procedimento

Close da borda emplumada de uma mancha de sangue

Um esfregaço de sangue é preparado colocando uma gota de sangue em uma lâmina de microscópio e usando uma segunda lâmina em um ângulo para espalhar o sangue e puxá-lo através da lâmina, formando uma "borda emplumada" consistindo de uma única camada de células no fim do esfregaço. Isso pode ser feito manualmente ou usando um fabricante de lâminas automatizado acoplado a um analisador de hematologia. A lâmina é tratada com uma coloração de Romanowsky, geralmente a coloração de Wright ou Wright-Giemsa, e examinada ao microscópio. O esfregaço é examinado em um padrão sistemático, varrendo de lado a lado dentro da borda emplumada e contando células consecutivamente. O diferencial é normalmente realizado com ampliação de 400x ou 500x , mas a ampliação de 1000x pode ser usada se células anormais estiverem presentes. As células são identificadas com base em suas características morfológicas , como o tamanho e a estrutura de seu núcleo e a cor e textura de seu citoplasma. Isso permite que tipos de células anormais e mudanças na aparência celular sejam identificados. Na maioria dos casos, o microscopista conta 100 leucócitos, mas 200 podem ser contados para melhor representação se a contagem de leucócitos for alta. A contagem diferencial manual produz porcentagens de cada tipo de célula, que podem ser multiplicadas pela contagem total de leucócitos do analisador para obter os valores absolutos.

O diferencial manual pode ser parcialmente automatizado com software de microscopia digital, que usa inteligência artificial para classificar leucócitos a partir de fotomicrografias do esfregaço de sangue. No entanto, esta técnica requer confirmação por revisão manual.

Limitações

Como relativamente poucas células são contadas no diferencial manual, a variabilidade é maior do que nas técnicas automatizadas, especialmente quando as células estão presentes em pequenas quantidades. Por exemplo, em uma amostra contendo 5 por cento de monócitos, os resultados diferenciais manuais podem estar entre 1 e 10 por cento devido à variação da amostra . Além disso, a identificação das células é subjetiva e a precisão depende das habilidades da pessoa que está lendo o slide. A preparação inadequada do esfregaço de sangue pode causar uma distribuição irregular dos glóbulos brancos, resultando em contagem imprecisa, e a coloração inadequada pode impedir a identificação das células. No geral, as contagens diferenciais manuais exibem coeficientes de variação (CVs) variando de 5 a 10 por cento, enquanto as contagens diferenciais automatizadas de neutrófilos e linfócitos normais têm CVs de cerca de 3 por cento.

Em leucemias e outras neoplasias hematológicas , a linhagem e as características genéticas dos glóbulos brancos têm implicações importantes para o tratamento e prognóstico, e a aparência microscópica das células costuma ser insuficiente para uma classificação precisa. Nestes casos, outras técnicas, como imunofenotipagem por citometria de fluxo ou coloração especial, podem ser utilizadas para a identificação definitiva das células.

Diferencial automatizado

Exemplo de um diagrama de dispersão diferencial de leucócitos: grupos de cores diferentes indicam populações de células diferentes

A maioria dos analisadores de hematologia fornece um diferencial de cinco partes, enumerando neutrófilos, linfócitos, monócitos, eosinófilos e basófilos. Alguns instrumentos também podem contar granulócitos imaturos e glóbulos vermelhos nucleados . Os analisadores hematológicos medem várias propriedades dos glóbulos brancos, como impedância, parâmetros de dispersão de luz e reações de coloração. Esses dados são analisados ​​e plotados em um diagrama de dispersão , formando grupos distintos que correspondem aos tipos de leucócitos. O analisador conta muito mais células do que as contadas em um diferencial manual, resultando em maior precisão. Se houver características anormais ou populações de células que o analisador não consegue identificar, o instrumento pode sinalizar os resultados para análise manual de esfregaço de sangue.

Procedimento

Um analisador hematológico automatizado (Sysmex XT-4000i)

As técnicas comuns usadas por analisadores de hematologia para identificar células incluem dispersão de luz, contagem de Coulter e técnicas de coloração citoquímica. Alguns analisadores também usam análise de radiofrequência e marcação de anticorpos monoclonais para identificar as células. As técnicas de coloração usadas em analisadores diferenciais incluem a coloração de mieloperoxidase , uma enzima encontrada em células de linhagem mielóide , e ácidos nucléicos , que são encontrados em concentrações mais altas em células imaturas.

Um pequeno volume de sangue (tão baixo quanto 150 microlitros) é aspirado para o analisador, onde os reagentes são aplicados para lisar os glóbulos vermelhos e preservar os glóbulos brancos. A amostra é diluída e passada para uma célula de fluxo, que usa focagem hidrodinâmica para isolar células individuais para uma análise precisa de suas propriedades. Vários parâmetros celulares, como tamanho, complexidade e reações de coloração, são medidos e analisados ​​para identificar as populações de células. Basófilos são frequentemente quantificados usando um reagente que lise o citoplasma de outras células brancas do sangue, mas deixa os basófilos intactos. As amostras com resultados anormais ou com suspeita de conter células anormais são sinalizadas pelo analisador para análise manual do esfregaço de sangue.

Para garantir que os resultados do analisador automatizado estão corretos, as amostras de controle de qualidade são executadas pelo menos uma vez por dia. Estas são amostras com resultados conhecidos que são mais frequentemente fornecidas pelo fabricante do instrumento. Os laboratórios comparam seus resultados diferenciais aos valores conhecidos para garantir que o instrumento esteja operando corretamente. Uma medição de média móvel também pode ser usada, na qual os resultados médios para amostras de pacientes são medidos em determinados intervalos. Supondo que as características da população de pacientes permaneçam aproximadamente as mesmas ao longo do tempo, a média deve permanecer constante. Grandes mudanças no valor médio podem indicar problemas no instrumento.

Limitações

Quando há presença de leucócitos imaturos ou anormais, os resultados diferenciais automatizados podem estar incorretos, sendo necessária uma análise manual do esfregaço de sangue. No geral, 10 a 25 por cento das amostras de CBC são marcadas para revisão manual pelo analisador. Embora a maioria das amostras anormais sejam sinalizadas automaticamente, algumas podem ser perdidas; inversamente, os analisadores podem gerar falsos positivos quando não há células anormais presentes. Os laboratórios de hematologia compensam esses problemas exigindo uma revisão de esfregaço quando os resultados diferenciais ou CBC ficam fora de certos limites numéricos, independentemente da presença de sinalizadores do analisador. A sensibilidade e a especificidade da sinalização do analisador podem ser determinadas comparando as sinalizações do analisador com os resultados diferenciais manuais.

A contagem automatizada de basófilos é notoriamente não confiável, frequentemente subestimando a contagem na basofilia e produzindo resultados falsamente elevados na presença de células anormais. O diferencial manual é, portanto, considerado o método de referência para essas células.

Os analisadores podem contar glóbulos vermelhos nucleados, plaquetas gigantes e aglomeradas e glóbulos vermelhos contendo hemoglobinas anormais (como a hemoglobina S na doença falciforme ) como glóbulos brancos, levando a resultados diferenciais defeituosos. As contagens diferenciais automatizadas em amostras envelhecidas podem estar incorretas devido à degeneração celular.

Tipos de células e interpretação dos resultados

Neutrófilo

Os neutrófilos são os glóbulos brancos mais comuns no sangue adulto normal. Quando corados com uma coloração de Romanowsky, exibem um núcleo multilobulado e citoplasma rosa que contém pequenos grânulos roxos.

A contagem de neutrófilos é normalmente mais alta em recém-nascidos e mulheres grávidas do que em outros grupos. Fora dessas condições, o aumento da contagem de neutrófilos ( neutrofilia ) está associado à infecção bacteriana , inflamação e várias formas de estresse fisiológico. A contagem de neutrófilos pode se tornar extremamente alta em resposta a algumas infecções e estados inflamatórios, o que é denominado reação leucemóide porque a contagem alta de leucócitos imita a leucemia. A neutrofilia também pode ocorrer em doenças mieloproliferativas .
A neutropenia , ou seja, uma contagem baixa de neutrófilos, pode ocorrer como resposta ao tratamento com medicamentos (especialmente quimioterapia) ou em certas infecções, como tuberculose e sepse por Gram-negativos . A neutropenia também ocorre em muitos distúrbios hematológicos, como leucemia e síndrome mielodisplásica , e em uma variedade de doenças autoimunes e congênitas. Uma contagem de neutrófilos abaixo do intervalo de referência pode ser normal em indivíduos de certas etnias; isso é denominado neutropenia étnica benigna . Contagens muito baixas de neutrófilos estão associadas à imunossupressão .

Quando estimulados por infecção ou inflamação, os neutrófilos podem desenvolver características anormais em seu citoplasma, como granulação tóxica , vacuolização tóxica e corpos de Döhle . Essas características, que são causadas pela liberação de citocinas , são conhecidas coletivamente como alterações tóxicas.

Linfócito

Os linfócitos , que são o segundo tipo mais comum de glóbulos brancos em adultos, são normalmente células pequenas com um núcleo redondo e escuro e uma faixa fina de citoplasma azul claro. Alguns linfócitos são maiores e contêm alguns grânulos azuis.

O aumento da contagem de linfócitos ( linfocitose ) pode ser causado por infecções virais e também pode ocorrer após a esplenectomia . As crianças têm contagens de linfócitos mais altas do que os adultos. A leucemia linfocítica crônica se apresenta com contagem elevada de linfócitos e morfologia anormal dos linfócitos, na qual os linfócitos têm núcleos aglomerados extremamente densos e algumas células aparecem borradas no esfregaço de sangue.
Baixas contagens de linfócitos ( linfopenia ) podem ser observadas em infecções como HIV / AIDS , influenza e hepatite viral , bem como em desnutrição protéico-energética , doenças agudas e reações a medicamentos.

Em resposta a infecções virais (especialmente mononucleose infecciosa ), os linfócitos podem aumentar muito de tamanho, desenvolvendo núcleos de formato incomum e grandes quantidades de citoplasma azul escuro. Essas células são referidas como linfócitos reativos ou atípicos e, quando presentes, são comentadas ou contadas separadamente dos linfócitos normais no diferencial manual.

Monócito

Os monócitos são células grandes com um núcleo curvo ou dobrado e citoplasma cinza-azulado finamente granulado que geralmente contém vacúolos . Os monócitos são o terceiro glóbulo branco mais comum, depois dos neutrófilos e dos linfócitos.

Contagens aumentadas de monócitos ( monocitose ) são observadas na infecção e inflamação crônicas. Contagens de monócitos extremamente altas, assim como formas imaturas de monócitos, ocorrem na leucemia mielomonocítica crônica e leucemias agudas de origem monocítica. A contagem de monócitos pode estar diminuída ( monocitopenia ) em indivíduos que estão recebendo quimioterapia, bem como naqueles com anemia aplástica , queimaduras graves e AIDS.

Eosinófilo

Os eosinófilos possuem grandes grânulos laranja em seu citoplasma e núcleos bilobados. Eles são encontrados em pequenas quantidades no sangue normal.

Contagens elevadas de eosinófilos ( eosinofilia ) estão associadas a reações alérgicas , infecções parasitárias e asma. A contagem de eosinófilos pode diminuir na gravidez e em resposta ao estresse fisiológico, inflamação ou tratamento com certos medicamentos, como esteróides e epinefrina .

Basófilo

Os basófilos exibem grandes grânulos roxos escuros que freqüentemente cobrem o núcleo da célula. Eles são os mais raros dos cinco tipos de células normais.

Basofilia e eosinofilia podem ocorrer junto com outras anormalidades dos glóbulos brancos na leucemia mieloide crônica e outros distúrbios mieloproliferativos. Uma contagem elevada de basófilos também pode ser observada em reações de hipersensibilidade e após a esplenectomia. A contagem de basófilos pode diminuir durante a ovulação , tratamento com esteróides e períodos de estresse fisiológico.

Neutrófilo de banda

Os neutrófilos em banda são formas jovens de neutrófilos sem segmentação do núcleo . Essas células, que são identificadas por contagem manual, são encontradas em números baixos no sangue adulto normal.

Uma mudança para a esquerda , significando um aumento na banda de neutrófilos ou granulócitos imaturos, pode indicar infecção, inflamação ou distúrbios da medula óssea, embora também possa ser um achado normal na gravidez . Alguns laboratórios não separam bandas de neutrófilos maduros na contagem diferencial porque a classificação é altamente subjetiva e não confiável.

Granulócito imaturo

Granulócitos imaturos são formas imaturas de neutrófilos e outros granulócitos (eosinófilos e basófilos). Essa classificação consiste em metamielócitos , mielócitos e promielócitos , que podem ser enumerados separadamente no diferencial manual ou relatados juntos como granulócitos imaturos (IG) por métodos automatizados. Os granulócitos imaturos são normalmente encontrados na medula óssea , mas não no sangue periférico.

Quando presentes em quantidades significativas no sangue, os granulócitos imaturos podem indicar infecção e inflamação, bem como doença mieloproliferativa , leucemia e outras condições que afetam a medula. Os IGs também podem ser aumentados com o uso de esteróides e gravidez. A leucemia mieloide crônica freqüentemente se apresenta com um alto número de granulócitos imaturos no sangue periférico. Os promielócitos anormais com vários bastonetes de Auer , chamados de células fagot , ocorrem na leucemia promielocítica aguda .

Célula de explosão

As células blásticas são células muito imaturas, normalmente encontradas na medula óssea, onde se desenvolvem em células maduras ( hematopoiese ) antes de serem liberadas no sangue. Eles podem ser identificados por seu grande tamanho geral, citoplasma azul profundo e núcleo grande com cromatina fina e nucléolos proeminentes .

Quando observadas no esfregaço de sangue, as células blásticas são um achado anormal e podem ser indicativas de leucemia aguda ou outras doenças sangüíneas graves. Raramente, eles podem ser vistos em casos graves de desvio à esquerda. A presença de bastonetes de Auer dentro das células blásticas indica que eles são de origem mieloide , o que tem implicações importantes para o tratamento da leucemia. Outras características morfológicas podem fornecer informações sobre a linhagem das células blásticas: por exemplo, os mieloblastos tendem a ser grandes com nucléolos distintos, enquanto os linfoblastos podem ser menores com um padrão de cromatina mais denso. No entanto, esses recursos não são diagnósticos, e a citometria de fluxo ou coloração especial geralmente é usada para confirmar a linhagem.

Outras células

Várias outras células anormais podem estar presentes no sangue em certas condições. Por exemplo, as células do linfoma podem ser encontradas no diferencial manual em alguns casos de linfoma e, na leucemia dos mastócitos , os mastócitos , que normalmente estão confinados ao tecido, circulam no sangue. Existe um fenómeno muito raro denominado carcinocitémia, no qual são observadas células tumorais no esfregaço de sangue periférico.

História

Antes da introdução dos contadores de células automatizados, as contagens de células eram realizadas manualmente; glóbulos brancos e vermelhos e plaquetas foram contados usando microscópios. A primeira pessoa a publicar observações microscópicas de células sanguíneas foi Antonie van Leeuwenhoek , que relatou o aparecimento de células vermelhas em uma carta de 1674 para o Proceedings of the Royal Society of London ; Jan Swammerdam havia descrito os glóbulos vermelhos alguns anos antes, mas não havia publicado suas descobertas na época. Ao longo dos séculos 18 e 19, os avanços na tecnologia do microscópio, como as lentes acromáticas, permitiram que os glóbulos brancos e as plaquetas fossem contados em amostras não coradas. Na década de 1870, Paul Ehrlich desenvolveu uma técnica de coloração que poderia diferenciar entre os cinco tipos de glóbulos brancos. A coloração de Ehrlich usava uma combinação de um corante ácido e básico para tingir os glóbulos brancos e vermelhos simultaneamente. Dmitri Leonidovich Romanowsky aprimorou essa técnica na década de 1890, usando uma mistura de eosina e azul de metileno envelhecido , que produzia uma ampla gama de tons que não estavam presentes quando qualquer uma das manchas era usada sozinha. Isso foi denominado efeito Romanowsky e se tornou a base para a coloração de Romanowsky , a técnica que ainda é usada para tingir esfregaços de sangue para diferenciais manuais.

Nos primeiros anos do século 20, o diferencial de leucócitos se tornou uma prática comum nos Estados Unidos, mas as dificuldades de interpretação dos resultados colocam em dúvida a utilidade do teste. Em 1906, Charles Langdon Gibson apresentou o gráfico de Gibson, que comparava a contagem total de leucócitos com a contagem de neutrófilos para distinguir entre condições " piogênicas " e "não piogênicas" e prever a gravidade das infecções. Na mesma época, Josef Arneth propôs um sistema de classificação de neutrófilos por seu número de lobos nucleares - denominado "índice de lóbulos" ou contagem de Arneth - e estabeleceu um conjunto de intervalos de referência para a lobularidade dos neutrófilos. A análise de Arneth sobre a segmentação de neutrófilos foi posteriormente descoberta como tendo significado clínico limitado, mas a associação de neutrófilos hipersegmentados com vitamina B12 e deficiência de folato permanece aceita. Viktor Schilling  [ de ] , em 1912, propôs uma classificação diferente de neutrófilos, separando-os em " myelozyten , jugendliche , stabkernige e segmentkernige " - isto é, miel�itos, "juvenis" (metamielócitos), bastonetes (às vezes chamados "golpes"), e neutrófilos maduros totalmente segmentados - e comentou sobre o significado clínico do desvio à esquerda neutrofílico em conjunto com a contagem de leucócitos e a presença de alterações tóxicas. A monografia de Schilling, Das Blutbild und seine klinische Verwertung ( The Blood Picture and its Clinical Significance ), foi traduzida para o inglês em 1926, e seu sistema de classificação de neutrófilos rapidamente encontrou aceitação nos laboratórios americanos.

O primeiro analisador hematológico automatizado, o contador Coulter , foi inventado no início dos anos 1950 por Wallace H. Coulter . O analisador trabalhou com base no princípio de Coulter, que afirma que quando as células são suspensas em um fluido que transporta uma corrente elétrica e passam por uma abertura, elas causam diminuições na corrente proporcionais ao seu volume devido à sua baixa condutividade elétrica . O número e a magnitude dessas reduções podem ser usados ​​para contar as células sanguíneas e calcular seus tamanhos. O contador Coulter foi inicialmente projetado para contagem de glóbulos vermelhos , mas também provou ser eficaz para contagem de glóbulos brancos.

O contador Coulter Modelo A, o primeiro analisador de hematologia comercial

Depois que a contagem básica de células foi automatizada, o diferencial de leucócitos permaneceu um desafio. A pesquisa para automatizar a contagem diferencial começou na década de 1970 e teve duas abordagens principais: processamento digital de imagens e citometria de fluxo. Utilizando tecnologia desenvolvida nas décadas de 1950 e 60 para automatizar a leitura do exame de Papanicolaou , diversos modelos de analisadores de processamento de imagens foram produzidos. Esses instrumentos examinariam um esfregaço de sangue manchado para encontrar núcleos de células e, em seguida, tirariam um instantâneo de maior resolução da célula para analisá-la por densitometria . Eles eram caros, lentos e faziam pouco para reduzir a carga de trabalho no laboratório porque ainda exigiam que esfregaços de sangue fossem preparados e corados, então os sistemas baseados em citometria de fluxo se tornaram mais populares e, em 1990, nenhum analisador de imagem digital estava disponível comercialmente no Estados Unidos ou Europa Ocidental. Essas técnicas ressurgiram na década de 2000 com a introdução de plataformas de análise de imagens mais avançadas que usam redes neurais artificiais .

Os primeiros dispositivos de citometria de fluxo dispararam feixes de luz em células em comprimentos de onda específicos e mediram a absorbância, fluorescência ou dispersão de luz resultante, coletando informações sobre as características das células e permitindo que o conteúdo celular, como o DNA, fosse quantificado. Um desses instrumentos - o Espectrofotômetro Rapid Cell, desenvolvido por Louis Kamentsky em 1965 para automatizar a citologia cervical - poderia gerar diagramas de dispersão de células sanguíneas usando técnicas de coloração citoquímica. Leonard Ornstein, que ajudou a desenvolver o sistema de coloração no Espectrofotômetro Rapid Cell, e seus colegas criaram mais tarde o primeiro analisador diferencial de leucócitos para citometria de fluxo comercial, o Hemalog D. Introduzido em 1974, este analisador usava espalhamento de luz, absorbância e célula coloração para identificar os cinco tipos normais de glóbulos brancos, além de "células grandes não identificadas", uma classificação que geralmente consistia em linfócitos atípicos ou células blásticas. O Hemalog D podia contar 10.000 células em uma corrida, uma melhoria marcante em relação ao diferencial manual. Em 1977, estimava-se que "pelo menos 200" analisadores diferenciais automatizados estavam em uso em todo o mundo. Em 1981, a Technicon combinou o Hemalog D com o analisador Hemalog-8 para produzir o Technicon H6000, o primeiro hemograma completo e analisador diferencial combinado. Esse analisador não era popular entre os laboratórios de hematologia porque sua operação era trabalhosa, mas no final da década de 1980 ao início da década de 1990, sistemas semelhantes foram amplamente produzidos por outros fabricantes, como Sysmex , Abbott , Roche e Beckman Coulter .

Veja também

• Citometria de fluxo
• Contagem de células

Referências

Bibliografia