Fluorômetro Qubit - Qubit fluorometer
O fluorômetro Qubit é um instrumento de laboratório desenvolvido e distribuído pela Invitrogen (agora parte da Thermo Fisher ) que, entre outras aplicações, é usado para a quantificação de DNA , RNA e proteínas .
Princípio
O fluorômetro Qubit usa corantes fluorescentes para determinar a concentração de ácidos nucléicos ou proteínas em uma amostra. O outro método comum de medir a concentração de ácidos nucléicos e proteínas é o método de absorbância de UV, que usa um espectrofotômetro para medir a absorbância natural da luz a 260 nm (para DNA e RNA) ou 280 nm (para proteínas). Como tantas moléculas absorvem luz a 260 nm, esta medição está sujeita a imprecisão devido à potencial contaminação da amostra com essas outras moléculas e é incapaz de distinguir entre DNA, RNA, proteína ou nucleotídeos livres ou aminoácidos na amostra. Por outro lado, o sistema Qubit é fornecido com corantes fluorescentes que se ligam especificamente a analitos de interesse, como DNA de fita dupla (dsDNA), DNA de fita simples (ssDNA), RNA, miRNA ou proteína proporcionando uma quantificação mais precisa.
Corantes fluorescentes
Os ensaios Qubit (anteriormente conhecidos como Quant-iT) foram desenvolvidos e fabricados pela Molecular Probes anterior (agora uma parte da Life Technologies ). Cada corante é específico para um tipo de molécula (DNA, RNA ou proteína). Eles têm fluorescência extremamente baixa até se ligarem à molécula-alvo. A diferença na fluorescência entre o corante ligado e não ligado é de várias ordens de magnitude. Ao se ligar ao DNA, provavelmente por intercalação entre as bases, as moléculas do corante (PicoGreen) assumem uma forma mais rígida e tornam-se intensamente fluorescentes. Uma vez adicionado a uma solução de DNA, o corante Qubit DNA se liga ao DNA em segundos e atinge o equilíbrio em menos de dois minutos.
Em uma concentração específica do corante, a intensidade do sinal de fluorescência dessa mistura é diretamente proporcional à concentração de DNA na solução, mesmo na presença de outras biomoléculas. O fluorômetro Qubit pega esse sinal de fluorescência e o converte em uma medição de concentração de DNA, referindo-se a sondas de DNA de concentração conhecida. Em seguida, usa essa relação para calcular a concentração de uma amostra.
O sistema de quantificação Qubit inclui os seguintes corantes que são específicos para diferentes biomoléculas e concentrações (ds significa fita dupla, ss significa DNA de fita simples):
| Reagente / Ensaio | Intervalo de ensaio | Faixa de concentração inicial de amostra |
|---|---|---|
| Ensaio Qubit dsDNA HS | 0,2–100 ng | 10 pg / μl – 100 ng / μl |
| Ensaio Qubit dsDNA BR | 2–1.000 ng | 100 pg / μl – 1 μg / μl |
| Ensaio Qubit ssDNA | 1-200 ng | 50 pg / µL-200 ng / µL |
| Ensaio de RNA Qubit | 5–100 ng | 250 pg / μl – 100 ng / μl |
| Ensaio Qubit RNA BR | 20-1.000 ng | 1 ng / µ-1 µg / µL |
| Ensaio de proteína Qubit * | 0,25-5 μg | 12,5 μg / ml – 5 mg / ml |
Comparação com outros dispositivos
Outros fluorômetros também podem medir a fluorescência dos corantes Qubit e podem ser usados para quantificação de DNA, RNA e proteína da mesma maneira. No entanto, todos os outros fluorômetros exigem que o usuário use vários padrões de DNA e plote a concentração versus a absorbância em um gráfico. Os dados devem então ser ajustados a uma linha e, finalmente, a concentração da amostra calculada a partir da equação da linha. Embora seja um cálculo simples para qualquer cientista, o fluorômetro Qubit faz esse cálculo para o usuário, tornando-o mais rápido e fácil, além de ser mais barato que um fluorômetro típico.
Versões
A segunda geração, o Fluorômetro Qubit 2.0, foi lançada em 2010, a 3ª geração como Qubit 3.0 em 2014. A versão mais recente é o Qubit 4 que foi lançado em 2017.