Mancha de Romanowsky - Romanowsky stain

A coloração de Romanowsky , também conhecida como coloração de Romanowsky – Giemsa , é uma técnica de coloração prototípica que foi a precursora de várias colorações distintas, mas semelhantes, amplamente utilizadas em hematologia (o estudo do sangue) e citopatologia (o estudo de células doentes). As manchas do tipo Romanowsky são usadas para diferenciar células para exame microscópico em amostras patológicas , especialmente sangue e filmes de medula óssea , e para detectar parasitas como a malária no sangue. As manchas relacionadas ou derivadas das manchas do tipo Romanowsky incluem Giemsa , Jenner, Wright , Field , May – Grünwald e manchas de Leishman . A técnica de coloração tem o nome do médico russo Dmitri Leonidovich Romanowsky (1861–1921), que foi um dos primeiros a reconhecer seu potencial para uso como uma mancha de sangue.

Mecanismo

O valor da coloração de Romanowsky está em sua capacidade de produzir uma ampla gama de tons, permitindo que os componentes celulares sejam facilmente diferenciados. Esse fenômeno é conhecido como efeito Romanowsky ou, mais geralmente, como metacromasia .

Efeito Romanowsky

Esfregaço de sangue corado com Giemsa mostrando Plasmodium (centro da imagem), o parasita que causa infecções de malária .

Em 1891, Romanowsky desenvolveu uma coloração usando uma mistura de eosina (normalmente eosina Y ) e soluções envelhecidas de azul de metileno que formaram tons não atribuíveis apenas aos componentes da coloração: tons distintos de roxo na cromatina do núcleo da célula e dentro de grânulos no citoplasma de alguns glóbulos brancos. Isso ficou conhecido como efeito Romanowsky ou Romanowsky-Giemsa. A eosina e o azul de metileno puro isoladamente (ou em combinação) não produzem o efeito Romanowsky, e as manchas ativas que produzem o efeito são agora consideradas azuis B e eosina.

Azul de metileno policromado

As manchas do tipo Romanowsky podem ser feitas de uma combinação de corantes puros ou de azul de metileno que foi sujeito a desmetilação oxidativa , o que resulta na quebra do azul de metileno em várias outras manchas, algumas das quais são necessárias para produzir o efeito Romanowsky . O azul de metileno que passou por esse processo oxidativo é conhecido como "azul de metileno policromado". O azul de metileno policromado pode conter até 11 corantes, incluindo azul de metileno , azul A , azul B, azul C, tionina , violeta de metileno Bernthesen, metil tionolina e tionolina. A composição exata do azul de metileno policromado depende do método usado, e mesmo os lotes do corante do mesmo fabricante podem variar em composição.

Embora o azul B e a eosina tenham se mostrado os componentes necessários para produzir o efeito Romanowsky, essas manchas em suas formas puras nem sempre foram usadas na formulação das soluções de coloração. As fontes originais de azul B (um dos produtos de oxidação do azul de metileno) eram de soluções policromadas de azul de metileno, que foram tratadas com agentes oxidantes ou deixadas para envelhecer naturalmente no caso de Romanowsky. Ernst Malachowsky em 1891 foi o primeiro a propositalmente policromado azul de metileno para uso em uma coloração do tipo Romanowsky.

Tipos

May-Grünwald-Giemsa

A coloração May-Grünwald-Giemsa é um procedimento de duas etapas que inclui a primeira coloração com a coloração May-Grünwald, que não produz o efeito Romanowsky, seguida pela coloração da coloração Giemsa que produz o efeito Romanowsky.

Manchas de Wright e Wright-Giemsa

A mancha de Wright pode ser usada sozinha ou em combinação com a mancha de Giemsa, que é conhecida como a mancha de Wright-Giemsa. A mancha de Wright tem o nome de James Homer Wright, que em 1902 publicou um método usando calor para produzir azul de metileno policromado, que é combinado com eosina Y. O azul de metileno policromado é combinado com eosina e pode precipitar, formando um eosinato que é redissolvido em metanol . A adição de Giemsa à coloração de Wright aumenta o brilho da cor "púrpura-avermelhada" dos grânulos citoplasmáticos. As manchas de Wright e Wright-Giemsa são duas das manchas do tipo Romanowsky de uso comum nos Estados Unidos e são usadas principalmente para a coloração de filmes de sangue e medula óssea.

Mancha Leishman

Em 1901, William Leishman desenvolveu uma coloração semelhante à de Louis Jenner, mas com a substituição do azul de metileno puro pelo azul de metileno policromado. A coloração de Leishman é preparada a partir do eosinato de azul de metileno policromado e eosina Y usando metanol como solvente.

Mancha de Giemsa

O corante Giemsa é composto por "Azure II" e eosina Y com metanol e glicerol como solvente. Acredita-se que o "Azure II" seja uma mistura de azul B (que Giemsa chamou de "azul I") e azul de metileno, embora a composição exata do "azul I" seja considerada um segredo comercial. Formulações comparáveis ​​usando corantes conhecidos foram publicadas e estão disponíveis comercialmente. A coloração Giemsa é considerada a coloração padrão para detecção e identificação do parasita da malária.

Importâncias clínicas

Patologia do sangue e da medula óssea

Amostra de lavagem broncoalveolar corada com Diff-Quik , uma variante comercial de coloração de Romanowsky amplamente usada em citopatologia

As manchas do tipo Romanowsky são amplamente utilizadas no exame de sangue, na forma de esfregaços sanguíneos e no exame microscópico de biópsias de medula óssea e esfregaços de aspirado. O exame do sangue e da medula óssea pode ser importante no diagnóstico de uma variedade de doenças do sangue. Nos Estados Unidos, as variantes Wright e Wright-Giemsa dos corantes do tipo Romanowsky são amplamente utilizadas, enquanto na Europa a corante Giemsa é comumente empregada.

Detecção de malária e outros parasitas

Das manchas do tipo Romanowsky, a coloração Giemsa é especialmente importante na detecção e identificação de parasitas da malária em amostras de sangue . Os testes de detecção do antígeno da malária são uma alternativa à coloração e ao exame microscópico de esfregaços de sangue para a detecção da malária.

Uso em citopatologia

As manchas do tipo Romanowsky também são usadas para a coloração de espécimes citopatológicos , como os produzidos a partir de aspirados com agulha fina e líquido cefalorraquidiano de punções lombares .

História

Embora exista debate sobre quem merece crédito por este método de coloração geral, o uso popular atribuiu-o a Dmitri Leonidovich Romanowsky.

Na década de 1870, Paul Ehrlich usou uma mistura de corantes ácidos e básicos, incluindo fucsina ácida (corante ácido) e azul de metileno (corante básico) para examinar esfregaços de sangue. Em 1888, Cheslav Ivanovich Chenzinsky usou azul de metileno, mas substituiu a fucsina ácida usada por Ehrlich pela eosina. A combinação da coloração de Chenzinsky foi capaz de tingir o parasita da malária (um membro do gênero Plasmodium ). Nem as manchas de Ehrlich nem de Chenzinsky produziram o efeito Romanowsky, pois o azul de metileno que usaram não era policromado.

Dmitri Romanowsky em 1890 publicou descobertas preliminares de sua mancha de sangue (uma combinação de azul de metileno envelhecido e eosina), incluindo os resultados quando aplicado a sangue infectado com malária. Esse uso de azul de metileno policromado diferenciava a coloração de Romanowsky (e as formulações subsequentes) das de Ehrlich e Chenzinsky, que não apresentavam o matiz púrpura associado ao efeito Romanowsky. A publicação de Romanowsky de 1890 não incluiu uma descrição de como ele modificou sua solução de azul de metileno, mas em sua tese de doutorado de 1891 ele descreveu o azul de metileno da melhor maneira como usado depois que o molde começou a se formar na superfície. Além do uso de uma solução envelhecida de azul de metileno, a coloração de Romanowsky foi baseada na técnica de coloração de Chenzinsky. O uso de Romanowsky de seu método para estudar o parasita da malária foi atribuído ao contínuo interesse em seu método de coloração.

Ernst Malachowsky

Ernst Malachowsky foi creditado por observar independentemente a mesma combinação de manchas que Dmitri Romanowsky em 1891, embora ele também tenha sido considerado o primeiro a fazê-lo. Malachowsky foi o primeiro a usar uma solução de azul de metileno deliberadamente policromada, que Malachowsky conseguiu pela adição de bórax à mistura de coloração. Relata-se que Malachowsky demonstrou a mancha em 15 de junho de 1890 e, no mesmo ano, publicou um artigo "descrevendo sua demonstração pública". Tanto o método de Romanowsky quanto o de Malachowsky foram capazes de tingir o núcleo e o citoplasma do parasita da malária , quando até então os corantes usados ​​apenas coloriam o citoplasma.

Em 1899, Louis Leopold Jenner desenvolveu uma versão mais estável do azul de metileno e da mancha de eosina ao coletar o precipitado que se forma em misturas à base de água e redissolvê-lo em metanol . As manchas do tipo Romanowsky preparadas a partir dos precipitados coletados às vezes são conhecidas como eosinatos . Além de aumentar a estabilidade da mancha, o uso de metanol na mancha de Jenner teve o efeito de fixar as amostras de sangue, embora a versão de Jenner da mancha não produza o efeito Romanowsky.

Richard May e Ludwig Grünwald em 1892 publicaram uma versão da mancha (agora conhecida como mancha May-Grünwald ) que é semelhante à versão proposta por Jenner em 1899 e também não produz o efeito Romanowsky.

Em 1901, tanto Karl Reuter quanto William Leishman desenvolveram manchas que combinavam o uso de álcool como solvente por Louis Jenner e o uso de azul de metileno policromado por Malachowsky. Mancha de Reuter diferiam Jenner em usar álcool etílico em vez de metanol, e de Leishman diferiam Jenner usando eosina B , em vez de eosina Y .

James Homer Wright em 1902 publicou um método usando calor para policromado o azul de metileno, que ele combinou com a eosina Y. Esta técnica é conhecida como mancha de Wright .

O nome de Gustav Giemsa também se tornou associado à mancha, pois ele foi creditado com a publicação de uma formulação e protocolo úteis em 1902. Giemsa tentou usar combinações de corantes puros em vez de soluções de azul de metileno policromado que são altamente variáveis ​​em composição. Giemsa vendeu os direitos de produção de sua tintura, mas nunca publicou todos os detalhes sobre como a produziu, embora se pense que ele usou uma combinação de azul B e azul de metileno. Giemsa publicou uma série de modificações em seus corantes entre 1902 e 1934. Em 1904, ele sugeriu adicionar glicerina ao corante, junto com o metanol, para aumentar sua estabilidade.

Os corantes em pó Giemsa produzidos na Alemanha eram amplamente usados ​​nos Estados Unidos até a interrupção do fornecimento durante a Primeira Guerra Mundial , o que causou uma maior utilização do método de James Homer Wright para policromia azul de metileno.

Veja também

Referências