Coloração Ziehl-Neelsen - Ziehl–Neelsen stain

Visualização do Mycobacterium tuberculosis usando a coloração de Ziehl-Neelsen
Coloração Ziehl – ​​Neelsen (ácido resistente) - diagrama das etapas básicas

A coloração de Ziehl-Neelsen é um tipo de coloração ácido-resistente, introduzida pela primeira vez por Paul Ehrlich . A coloração de Ziehl-Neelsen é uma coloração bacteriológica usada para identificar organismos álcool-ácido resistentes , principalmente micobactérias . Tem o nome de dois médicos alemães que modificaram a coloração: o bacteriologista Franz Ziehl (1859–1926) e o patologista Friedrich Neelsen (1854–1898).

Micobactérias

Em amostras de patologia anatômica, a imuno - histoquímica e as modificações da coloração de Ziehl-Neelsen (como o método Fite-Faraco ) têm utilidade diagnóstica comparável. Ambos são superiores à coloração Ziehl-Neelsen tradicional.

O gênero Mycobacterium é uma bactéria de crescimento lento, composta por pequenos bastonetes levemente curvos ou retos, considerados gram-positivos. Alguns tipos de micobactérias formam ramos ou filamentos. Algumas micobactérias são saprófitas de vida livre, mas muitas são patógenos que causam doenças em animais e humanos. Mycobacterium bovis causa tuberculose em bovinos. Como a tuberculose pode se espalhar para os humanos, o leite é pasteurizado para matar qualquer uma das bactérias. Algumas espécies de Mycobacteria que causam doenças em humanos incluem Mycobacterium leprae , Mycobacterium kansasii , Mycobacterium marinum , Mycobacterium bovis , Mycobacterium africanum e membros do complexo Mycobacterium avium . Mycobacterium tuberculosis é uma espécie de Mycobacterium que causa tuberculose (TB). O Mycobacterium tuberculosis é uma bactéria transportada pelo ar que normalmente infecta os pulmões humanos. Os sintomas da tuberculose incluem tosse forte, dor no peito, fadiga, perda de peso, falta de apetite, calafrios, febre e suores noturnos. O regime típico para o tratamento de uma infecção por TB latente inclui o uso de isoniazida, rifapentina e rifampicina. O regime é alterado para aqueles que desenvolveram uma cepa de TB resistente aos medicamentos. O teste de tuberculose inclui exames de sangue, testes cutâneos e radiografias de tórax. Ao examinar os esfregaços para TB, ele é corado com um corante ácido-resistente. Esses organismos acidorresistentes, como o Mycobacterium, contêm grandes quantidades de substâncias lipídicas em suas paredes celulares, chamadas de ácidos micólicos. Esses ácidos resistem à coloração por métodos comuns, como a coloração de Gram . Também pode ser usado para corar algumas outras bactérias, como Nocardia . Os reagentes usados ​​para a coloração de Ziehl-Neelsen são - carbol fucsina , álcool ácido e azul de metileno . Os bacilos álcool-ácido resistentes ficam vermelhos brilhantes após a coloração.

Fungi

A coloração de Ziehl-Neelsen é um tipo de coloração fúngica de espectro estreito. As manchas fúngicas de espectro estreito são seletivas e podem ajudar a diferenciar e identificar fungos. Os resultados da coloração de Ziehl-Neelsen são variáveis ​​porque muitas paredes celulares de fungos não são ácido resistentes. Um exemplo de um tipo comum de fungo álcool-ácido resistente que geralmente é corado com a coloração de Ziehl-Neelsen é chamado de Histoplasma (HP). Histoplasma é encontrado no solo e nas fezes de pássaros e morcegos. Os humanos podem contrair histoplasmose por inalação dos esporos do fungo. O Histoplasma entra no corpo e vai para os pulmões, onde os esporos se transformam em levedura. A levedura chega à corrente sanguínea e afeta os gânglios linfáticos e outras partes do corpo. Normalmente as pessoas não ficam doentes ao inalar os esporos, mas se isso acontecer, geralmente apresentam sintomas semelhantes aos da gripe. Outra variação deste método de coloração é usada em micologia para corar diferencialmente incrustações ácido-resistentes nas hifas cuticulares de certas espécies de fungos do gênero Russula . Alguns endosporos livres podem ser confundidos com pequenas leveduras, então a coloração é usada para identificar os fungos desconhecidos. Também é útil na identificação de alguns protozoários, nomeadamente Cryptosporidium e Isospora . A coloração de Ziehl-Neelsen também pode dificultar o diagnóstico no caso de paragonimíase porque os ovos na amostra de escarro para óvulo e parasita (O&P) podem ser dissolvidos pela coloração e é frequentemente usada neste cenário clínico porque os sinais e sintomas da paragonimíase se assemelham muito aqueles da tuberculose.

História

Em 1882, Robert Koch descobriu a etiologia da tuberculose. Logo após a descoberta de Koch, Paul Ehrlich desenvolveu uma coloração para o Mycobacterium tuberculosis, chamada coloração de hematoxilina de alúmen. Franz Ziehl então alterou a técnica de coloração de Ehrlich usando ácido carbólico como mordente. Friedrich Neelsen manteve a escolha do mordente de Ziehl, mas mudou a coloração primária para carbol-fucsina. As modificações de Ziehl e Neelsen juntas desenvolveram a coloração Ziehl – ​​Neelsen. Outra coloração ácido-resistente foi desenvolvida por Joseph Kinyoun usando a técnica de coloração de Ziehl-Neelsen, mas removendo a etapa de aquecimento do procedimento. Esta nova mancha de Kinyoun foi chamada de mancha de Kinyoun.

Procedimento

Um procedimento típico de coloração de AFB envolve colocar as células em suspensão em uma lâmina, secar o líquido ao ar e fixar as células com calor.

Resumo da coloração ácido-resistente (coloração Ziehl-Neelsen)
Aplicação de Reagente Cor da célula
Ácido rápido Não ácido rápido
Corante primário Carbol fucsina vermelho vermelho
Descolorante Álcool ácido vermelho Incolor
Contra-mancha Azul de metileno / verde malaquita vermelho Azul

Estudos demonstraram que uma coloração de AFB sem cultura tem um valor preditivo negativo baixo. Uma cultura AFB deve ser realizada junto com uma coloração AFB; isso tem um valor preditivo negativo muito maior.

Mecanismo de coloração ácido-resistente em células álcool-ácido resistentes e células não-ácido-resistentes.

Explicação do mecanismo

Inicialmente, a fucsina carbol cora todas as células. Quando eles são desengordurados com álcool-ácido, apenas bactérias não ácido-resistentes são descoloradas, uma vez que não têm uma camada lipídica espessa e cerosa como as bactérias ácido-resistentes. Quando a contra-coloração é aplicada, bactérias não ácido-resistentes o pegam e se tornam azuis (azul de metileno) ou verdes (verde malaquita) quando vistas ao microscópio. Bactérias álcool-ácido resistentes retêm carbol-fucsina para que pareçam vermelhas.

Modificações

  • Álcool de ácido sulfúrico a 1% para actinomicetos , nocardia .
  • Álcool de ácido sulfúrico 0,5-1% para oocistos de isospora , cyclospora .
  • Álcool de ácido sulfúrico 0,25-0,5% para endosporos bacterianos.
  • Coloração diferencial - uso de ácido acético glacial, sem aplicação de calor, a coloração secundária é azul de metileno de Loeffler.
  • A modificação Kinyoun (ou técnica fria de Ziehl-Neelsen) também está disponível.
  • Um protocolo no qual um detergente é substituído pelo fenol altamente tóxico na solução de coloração com fucsina.

Veja também

Exemplos de protocolo online

Referências

Bibliografia

  • "Microbiology with Diseases by Body System", Robert W. Bauman, 2009, Pearson Education, Inc.

links externos