MELISA - MELISA
MELISA® ( Ensaio de Imunoestimulação de Linfócitos de Memória ) é um exame de sangue que detecta a hipersensibilidade do tipo IV a metais, produtos químicos, toxinas ambientais e fungos. As reações de hipersensibilidade do tipo IV, principalmente ao níquel, estão bem estabelecidas e podem afetar 20% da população.
Mecanismo
O teste MELISA mede a reação de hipersensibilidade retardada do tipo IV. As reações do tipo IV são mediadas por linfócitos T (ou linfócitos de memória) que tiveram contato prévio com um determinado alérgeno. Isso contrasta com a alergia do tipo I, que é mediada por anticorpos IgE e costuma ser testada por meio de um teste ELISA . Em indivíduos geneticamente predispostos, uma exposição contínua a alérgenos pode induzir hipersensibilidade do tipo IV.
O ensaio MELISA é uma cultura de células e requer linfócitos vivos de memória. Os linfócitos são isolados de uma amostra de sangue e cultivados em uma incubadora por cinco dias. Uma parte do sangue é mantida intacta (não exposta aos alérgenos) para servir como controle negativo. Uma segunda porção é exposta a um alérgeno universal, Pokeweed , para servir como um controle positivo. Finalmente, o sangue é exposto ao (s) alérgeno (s) suspeito (s) em várias concentrações diferentes, para garantir que as condições in vitro sejam tão semelhantes quanto possível às in vivo. A reacção de linfócitos a cada alergénio é medido por duas tecnologias distintas: uma baseada na absorção de uma radioactivo isótopo , 3 H-timidina, dividindo-se os linfócitos (proliferação); o outro por coloração celular e avaliação microscópica. O nível de reatividade é medido como um Índice de Estimulação (SI), contra os linfócitos virgens da amostra não exposta (controle negativo). A viabilidade e a reatividade são determinadas pela contagem de células, bem como pela reação ao controle positivo.
MELISA é uma versão otimizada e padronizada do teste de transformação de linfócitos (LTT) que foi desenvolvido no início dos anos 1960 para ajudar a identificar alergias a drogas, metabólitos e metais. O LTT para berílio é agora aceito como o padrão ouro para o diagnóstico de beriliose .
O MELISA difere dos LTTs padrão de várias maneiras:
- O MELISA usa triagem morfológica para fornecer um nível adicional de precisão. Isso garante que as células não relacionadas à hipersensibilidade (por exemplo, macrófagos) não sejam incluídas nas contagens radioativamente positivas
- MELISA usa monócitos parcialmente esgotados para replicar o equilíbrio de linfócitos / monócitos in vivo
- MELISA utiliza um maior número de linfócitos do que outros LTTs (1 x 10 6 células). Como as células de memória são relativamente raras, essa concentração mais alta de linfócitos garante maior sensibilidade.
Formulários
Odontologia
O MELISA foi desenvolvido para ajudar a avaliar o impacto da hipersensibilidade aos metais usados na odontologia. A hipersensibilidade aos metais dentais pode estar associada a reações orais locais, incluindo líquen plano oral, estomatite e ulceração.
A frequência de respostas de linfócitos induzidas por metal foi examinada em 3.162 pacientes odontológicos em três laboratórios europeus usando o teste MELISA. Os pacientes sofriam de sintomas locais e sistêmicos atribuídos às suas restaurações dentárias. O efeito da remoção do metal dentário foi estudado em 111 pacientes com hipersensibilidade ao metal e sintomas semelhantes à síndrome da fadiga crônica ( SFC ). Após consulta com um dentista, um subgrupo de 111 pacientes que apresentaram alergia aos seus metais dentais substituíram suas restaurações por materiais não metálicos. O níquel foi o sensibilizante mais comum, seguido pelo mercúrio inorgânico, ouro, fenilmercúrio, cádmio e paládio. Em comparação com as respostas dos linfócitos em indivíduos saudáveis, o grupo CFS teve respostas significativamente aumentadas a vários metais, especialmente ao mercúrio inorgânico, fenilmercúrio e ouro.
Após a remoção do metal dentário:
- 76% relataram melhora de saúde a longo prazo
- 22% relataram saúde inalterada
- 2% relataram piora dos sintomas
Ortopedia e cirurgia
A hipersensibilidade do tipo IV a metais é comum, particularmente ao níquel; no entanto, complicações relacionadas à hipersensibilidade associadas a implantes de metal são relatadas com menos frequência. As complicações de hipersensibilidade potenciais incluem erupções cutâneas, dores articulares crônicas, inchaço, afrouxamento asséptico e insuficiência articular.
Muitos autores concluem que os testes de sangue baseados em LTT, como o MELISA, podem ser uma opção melhor para detectar alergias sistêmicas de implantes, enquanto o teste de contato é mais adequado para detectar hipersensibilidade dérmica. Eles acrescentam que o teste baseado em LTT também pode ser uma boa opção em casos de hipersensibilidade indeterminada ou em pacientes com insuficiência articular de causa desconhecida, uma vez que tem maior sensibilidade do que o teste de contato
Alguns cirurgiões e pesquisadores sugerem o teste de LTT antes da cirurgia em pacientes com suspeita / autorrelato de alergia a metais
Hipersensibilidade ao titânio
O titânio e sua liga principal (Ti6Al4V) são geralmente vistos como opções hipoalergênicas para artroplastia e implantes dentários. Embora incomum, com uma prevalência estimada entre 0,6-6,3%, a hipersensibilidade ao titânio foi relatada pós-implantação com sintomas incluindo dificuldade de cicatrização da fratura, eczema local, dor, inchaço, dermatite sistêmica, afrouxamento do implante e falha, todos os quais foram relatado para resolver com a remoção do implante e substituição por um implante de não titânio
Na cirurgia da coluna vertebral, partículas microscópicas de titânio estão presentes nos tecidos que circundam o implante. Essas partículas ativam macrófagos que aumentam a absorção óssea e as reações inflamatórias. Nanopartículas liberadas circularão nos fluidos corporais, eventualmente se acumulando em órgãos remotos.
O titânio demonstrou induzir hipersensibilidade clinicamente relevante, que pode ser detectada com o teste MELISA. A precisão do teste de contato para alergia ao titânio, em particular, parece ser variável; a clínica Mayo não encontrou nenhuma reação positiva ao titânio em mais de uma década, apesar de vários casos publicados de alergia ao titânio.
Doenças crônicas
O teste também é usado para determinar se a alergia a metais é um fator que contribui para o desenvolvimento de doenças crônicas, como SFC (Sterzl, et al., 1999) e esclerose múltipla . Os autores levantam a hipótese de que, se o sistema imunológico está constantemente exibindo uma reação alérgica a um metal presente no corpo, isso alertará o eixo HPA, induzindo sintomas semelhantes aos da fadiga. Um estudo (Stejskal, et al., 1999) de 930 pacientes com sintomas semelhantes aos da SFC mostrou 62% com testes positivos para MELISA para alergia a metais. Daqueles que removeram os metais ofensivos, 76% melhoraram, mas não houve controle com placebo. A hipersensibilidade ao metal não é amplamente reconhecida pelos pesquisadores como uma causa aceita de SFC ou esclerose múltipla .
Medicina Ocupacional
O teste MELISA é usado em medicina do trabalho e saúde ambiental. Ele tem sido usado para examinar trabalhadores expostos a metais, produtos químicos ou outros alérgenos em seu local de trabalho. É para isso que o teste foi desenvolvido originalmente, nos laboratórios da Astra (agora Astra-Zeneca) em Södertälje, Suécia. Nos EUA, uma técnica semelhante (BeLT) é rotineiramente usada para rastrear alergia ao berílio em trabalhadores assintomáticos expostos à poeira de berílio (Mroz, et al., 1991) (Newman LS, 1996).
Validade
Embora dois artigos tenham concluído que o teste MELISA pode dar reações falso-positivas (Cederbrant, et al., 1999) (Cederbrant, et al., 1997), um estudo subsequente concluiu que o teste MELISA é "reprodutível, sensível, específico e confiável para detectar a sensibilidade ao metal em pacientes sensíveis ao metal. " (Valentine-Thon & Schiawara, 2003)
Os desenvolvedores do teste MELISA argumentam que os artigos críticos calcularam a sensibilidade e a especificidade dos testes de proliferação de linfócitos in vitro usando o teste de contato como referência. É bem conhecido que o teste de remendo pode causar reações locais irritantes. É geralmente aceito que os testes baseados em LTT, como o MELISA, são mais adequados para diagnosticar a sensibilidade de metais relacionados ao implante do que o teste de patch, pois a relação entre a hipersensibilidade cutânea e a hipersensibilidade sistêmica (Ständer, et al., 2017) é mal definida. Realizar o LTT sob condições estimulantes otimizadas pode ser uma ferramenta adicional útil para o diagnóstico de hipersensibilidade (Ständer, et al., 2017) (FDA, 2019). Para testar se os pacientes com sintomas atribuídos ao amálgama dentário diferiam de controles saudáveis, um estudo comparou 23 pacientes com amálgama, 30 indivíduos que se consideravam saudáveis com amálgama e 10 indivíduos sem amálgama usando MELISA e outros testes. Os pesquisadores descobriram que uma alta frequência de resultados positivos foi obtida entre indivíduos saudáveis com ou sem amálgama dentário e concluíram que o teste não pode ser usado como um teste objetivo para alergia ao mercúrio (Cederbrant, et al., 1999).
Outro estudo do mesmo autor crítico utilizou 34 pacientes para testar a sensibilidade e especificidade do teste MELISA, e concluiu que não é útil para o diagnóstico de alergia de contato aos metais ouro, paládio e níquel, uma vez que muitos resultados falso-positivos serão obtido (Cederbrant, et al., 1997). A relevância clínica do teste foi demonstrada pela diminuição das respostas específicas aos metais relatadas pelo paciente após a remoção dos metais causadores da alergia (no entanto, o estudo não teve um controle com placebo). (Stejskal, et al., 2006) (Valentine-Thon, et al., 2006)