Pfu DNA polimerase - Pfu DNA polymerase
| Pfu DNA polimerase | |||||||
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| Identificadores | |||||||
| Organismo | |||||||
| Símbolo | pol | ||||||
| PDB | 4ahc | ||||||
| UniProt | P61875 | ||||||
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Pfu DNA polimerase é uma enzima encontrada no archaeon hipertermofílico Pyrococcus furiosus , onde funciona para copiar o DNA do organismodurante a divisão celular. No ambiente de laboratório, Pfu é usado para amplificar DNA na reação em cadeia da polimerase (PCR), onde a enzima tem a função central de copiar uma nova fita de DNA durante cada etapa de extensão.
É uma família B ADN polimerase . Possui um domínio de exonuclease 3'-5 'semelhante a RNase H , típico da polimerase da família B, como a DNA polimerase II .
Capacidade de revisão da polimerase Pfu
Pfu DNA polimerase tem propriedades de termostabilidade e revisão superiores em comparação com Taq DNA polimerase . Ao contrário da Taq DNA polimerase, a Pfu DNA polimerase possui atividade de revisão de exonuclease 3 'a 5' , o que significa que, conforme o DNA é montado da extremidade 5 ' à extremidade 3' , a atividade de exonuclease remove imediatamente os nucleotídeos incorretamente incorporados na extremidade 3 'do crescimento Faixa de DNA. Consequentemente, os fragmentos de PCR gerados pela Pfu DNA polimerase terão menos erros do que as inserções de PCR geradas por Taq .
Pfu comercialmente disponível normalmente resulta em uma taxa de erro de 1 em 1,3 milhões de pares de bases e pode render 2,6% de produtos mutados ao amplificar fragmentos de 1 kb usando PCR. No entanto, o Pfu é mais lento e normalmente requer 1–2 minutos por ciclo para amplificar 1kb de DNA a 72 ° C. O uso de Pfu DNA polimerase em reações de PCR também resulta em produtos de PCR com extremidades cegas.
A polimerase de DNA Pfu é, portanto, superior à polimerase de DNA Taq para técnicas que requerem síntese de DNA de alta fidelidade, mas também pode ser usada em conjunto com a polimerase Taq para obter a fidelidade de Pfu com a velocidade da atividade da polimerase Taq .
História
Os cientistas conduzidos por Eric Mathur na empresa Stratagene biotecnologia, com base em La Jolla, Califórnia , descobriu Pfu ADN polimerase que exibe uma significativamente maior fidelidade de replicação do que ADN-polimerase Taq, em 1991. Eles receberam patentes para exonuclease deficiente Pfu e o total de Pfu em 1996 .
Outras polimerases de cepas de Pyrococcus , como "Deep Vent" ( Q51334 ) da cepa GB-D e Pwo DNA polimerase também viram uso.
