Teste de compatibilidade de sangue - Blood compatibility testing
| Teste de compatibilidade de sangue | |
|---|---|
 O tipo de sangue positivo determinado pelo método do tubo. Da esquerda para a direita: Os glóbulos vermelhos do paciente não aglutinam com os reagentes anti-A e anti-B, mas aglutinam com o reagente anti-D. O plasma do paciente aglutina os glóbulos vermelhos do tipo A1 e B.
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| Propósito | Identificação de incompatibilidades entre grupos sanguíneos |
| Teste de | Glóbulos vermelhos ; plasma sanguíneo |
| MedlinePlus | 003345 |
| eMedicine | 1731198 |
| LOINC | 34532-2 , 883-9 , 10331-7 |
O teste de compatibilidade de sangue é realizado em um laboratório médico para identificar possíveis incompatibilidades entre os tipos de sangue na transfusão de sangue . Também é usado para diagnosticar e prevenir algumas complicações da gravidez que podem ocorrer quando o bebê tem um grupo sanguíneo diferente do da mãe. Os testes de compatibilidade sanguínea incluem tipagem sanguínea , que detecta os antígenos nas células vermelhas do sangue que determinam o tipo de sangue de uma pessoa; teste de anticorpos inesperados contra antígenos de grupos sanguíneos ( seleção e identificação de anticorpos ); e, no caso de transfusões de sangue, mistura do receptorplasma com os glóbulos vermelhos do doador para detectar incompatibilidades ( combinação cruzada ). A tipagem sanguínea de rotina envolve a determinação do tipo ABO e RhD (fator Rh) e envolve a identificação de antígenos ABO nas hemácias (agrupamento direto) e a identificação de anticorpos ABO no plasma (agrupamento reverso). Outros antígenos de grupo sanguíneo podem ser testados em situações clínicas específicas.
Os testes de compatibilidade sanguínea usam reações entre antígenos de grupos sanguíneos e anticorpos - especificamente a capacidade dos anticorpos de fazer com que os glóbulos vermelhos se aglutinem quando se ligam a antígenos na superfície da célula, um fenômeno denominado aglutinação . As técnicas que dependem de reações antígeno-anticorpo são chamadas de métodos sorológicos , e vários desses métodos estão disponíveis, variando de testes manuais usando tubos de ensaio ou lâminas a sistemas totalmente automatizados. Os tipos de sangue também podem ser determinados por meio de testes genéticos , que são usados quando as condições que interferem nos testes sorológicos estão presentes ou quando é necessário um alto grau de precisão na identificação do antígeno.
Várias condições podem causar resultados falsos ou inconclusivos nos testes de compatibilidade sanguínea. Quando esses problemas afetam a digitação ABO, eles são chamados de discrepâncias ABO . Discrepâncias ABO devem ser investigadas e resolvidas antes que o tipo de sangue da pessoa seja relatado. Outras fontes de erro incluem o fenômeno " D fraco ", no qual as pessoas positivas para o antígeno RhD apresentam reações fracas ou negativas quando testadas para RhD e a presença de anticorpos da imunoglobulina G nos glóbulos vermelhos, o que pode interferir na triagem de anticorpos , crossmatching e tipagem para alguns antígenos de grupo sanguíneo.
Usos médicos
O teste de compatibilidade de sangue é realizado rotineiramente antes de uma transfusão de sangue . O processo de teste de compatibilidade completo envolve tipagem ABO e RhD (fator Rh); rastreio de anticorpos contra outros sistemas de grupo sanguíneo ; e crossmatching , que envolve testar o plasma sanguíneo do receptor contra os glóbulos vermelhos do doador como uma verificação final de incompatibilidade. Se um anticorpo inesperado de grupo sanguíneo for detectado, testes adicionais são necessários para identificar o anticorpo e garantir que o sangue do doador seja negativo para o antígeno relevante. A comparação sorológica pode ser omitida se a triagem de anticorpos do receptor for negativa, não houver história de anticorpos clinicamente significativos e seu tipo ABO / Rh tiver sido confirmado contra registros históricos ou contra uma segunda amostra de sangue; e em emergências, o sangue pode ser transfundido antes que os resultados dos testes de compatibilidade estejam disponíveis.
O teste de compatibilidade de sangue é frequentemente realizado em mulheres grávidas e no sangue do cordão umbilical de bebês recém-nascidos, porque a incompatibilidade coloca o bebê em risco de desenvolver doença hemolítica do recém-nascido. Também é usado antes do transplante de células-tronco hematopoiéticas , porque a incompatibilidade do grupo sanguíneo pode ser responsável por alguns casos de doença do enxerto contra hospedeiro aguda .
Princípios
Os tipos sanguíneos são definidos de acordo com a presença ou ausência de certos antígenos na superfície das hemácias. Os mais importantes deles na medicina são os antígenos ABO e RhD, mas muitos outros sistemas de grupos sanguíneos existem e são clinicamente relevantes em certas situações. Em 2021, 41 grupos sanguíneos são oficialmente reconhecidos.
Pessoas que não possuem certos antígenos de grupo sanguíneo em seus glóbulos vermelhos podem formar anticorpos contra esses antígenos. Por exemplo, uma pessoa com sangue do tipo A produzirá anticorpos contra o antígeno B. Os anticorpos do grupo sanguíneo ABO ocorrem naturalmente, o que significa que são encontrados em pessoas que não foram expostas a sangue incompatível. Os anticorpos para a maioria dos outros antígenos do grupo sanguíneo, incluindo RhD, se desenvolvem depois que as pessoas são expostas aos antígenos por meio de transfusão ou gravidez. Alguns desses anticorpos podem se ligar a glóbulos vermelhos incompatíveis e fazer com que sejam destruídos , resultando em reações transfusionais e outras complicações.
Os métodos sorológicos para testes de compatibilidade sanguínea usam essas reações de anticorpo-antígeno . Na tipagem sanguínea, os reagentes contendo anticorpos do grupo sanguíneo, chamados anti-soros , são adicionados a suspensões de células sanguíneas. Se o antígeno relevante estiver presente, os anticorpos no reagente farão com que as hemácias se aglutinem ( aglutinem ), o que pode ser identificado visualmente. Na triagem de anticorpos, o plasma do indivíduo é testado contra um conjunto de glóbulos vermelhos com perfis de antígenos conhecidos; se o plasma aglutinar uma das hemácias do painel, isso indica que o indivíduo possui um anticorpo contra um dos antígenos presentes nas células. Na prova cruzada, o plasma de um possível receptor de transfusão é adicionado aos glóbulos vermelhos do doador e observado para aglutinação (ou hemólise) para detectar anticorpos que poderiam causar reações transfusionais.
Os anticorpos do grupo sanguíneo ocorrem em duas formas principais: imunoglobulina M (IgM) e imunoglobulina G (IgG). Os anticorpos que são predominantemente IgM, como os anticorpos ABO, geralmente causam aglutinação imediata de glóbulos vermelhos em temperatura ambiente. Portanto, o tipo de sangue ABO de uma pessoa pode ser determinado simplesmente adicionando os glóbulos vermelhos ao reagente e centrifugando ou misturando a amostra e, na comparação cruzada, a incompatibilidade entre os tipos ABO pode ser detectada imediatamente após a centrifugação. Tipagem RhD também normalmente usa reagentes IgM, embora o anti-RhD geralmente ocorra como IgG no corpo. Os anticorpos que são predominantemente IgG, como aqueles direcionados a antígenos dos sistemas Duffy e Kidd , geralmente não causam aglutinação imediata porque o tamanho pequeno do anticorpo IgG evita a formação de uma estrutura de rede. Portanto, a tipagem sanguínea usando anti-soros IgG e detecção de anticorpos IgG requer o uso do teste de antiglobulina indireto para demonstrar a ligação de IgG aos glóbulos vermelhos.
No teste indireto de antiglobulina, a mistura de anti-soro ou plasma e hemácias é incubada a 37 ° C (99 ° F), temperatura ideal para reatividade de anticorpos IgG. Após a incubação, os glóbulos vermelhos são lavados com solução salina para remover os anticorpos não ligados, e o reagente de globulina anti-humana é adicionado. Se os anticorpos IgG se ligaram a antígenos na superfície da célula, a globulina anti-humana se ligará a esses anticorpos, fazendo com que os glóbulos vermelhos se aglutinem após a centrifugação. Se a reação for negativa, "células de verificação" - células reagentes revestidas com IgG - são adicionadas para garantir que o teste está funcionando corretamente. Se o resultado do teste for realmente negativo, as células de verificação devem reagir com a globulina anti-humana não ligada e demonstrar aglutinação.
Tipagem sanguínea
Tipagem ABO e Rh
Na tipagem ABO e Rh, reagentes contendo anticorpos contra os antígenos A, B e RhD são adicionados a suspensões de células sanguíneas. Se o antígeno relevante estiver presente, os anticorpos no reagente farão com que os glóbulos vermelhos se aglutinem ( aglutinem ), o que pode ser identificado visualmente. Além de identificar os antígenos ABO, que é denominado agrupamento direto, a tipagem sanguínea ABO de rotina também inclui a identificação dos anticorpos ABO no plasma da pessoa. Isso é chamado de agrupamento reverso e é feito para confirmar o tipo de sangue ABO. No agrupamento reverso, o plasma da pessoa é adicionado aos glóbulos vermelhos do tipo A 1 e do tipo B. O plasma deve aglutinar as células que expressam os antígenos que faltam à pessoa, enquanto deixa de aglutinar as células que expressam os mesmos antígenos do paciente. Se isso não ocorrer, mais testes são necessários. A aglutinação é pontuada de 1+ a 4+ com base na força da reação. Na tipagem ABO, uma pontuação de 3+ ou 4+ indica uma reação positiva, enquanto uma pontuação de 1+ ou 2+ é inconclusiva e requer uma investigação mais aprofundada.
Outros sistemas de grupo sanguíneo
Antes de receber uma transfusão de sangue, os indivíduos são testados quanto à presença de anticorpos contra antígenos de sistemas de grupo sanguíneo não ABO . Os antígenos do grupo sanguíneo além de ABO e RhD que são significativos na medicina de transfusão incluem os antígenos RhC / c e E / e e os antígenos dos sistemas Duffy , Kell , Kidd e MNS . Se um anticorpo clinicamente significativo for identificado, o receptor deve ser transfundido com sangue negativo para o antígeno correspondente para evitar uma reação transfusional. Isso requer que as unidades doadoras sejam tipadas para o antígeno relevante. O receptor também pode ser digitado para o antígeno para confirmar a identidade do anticorpo, já que apenas os indivíduos que são negativos para um antígeno de grupo sanguíneo devem produzir anticorpos contra ele.
Na Europa, as mulheres que precisam de transfusões de sangue são frequentemente tipadas para os antígenos Kell e Rh estendido para evitar a sensibilização a esses antígenos, o que poderia colocá-las em risco de desenvolver doença hemolítica do recém-nascido durante a gravidez. A American Society of Hematology recomenda que as pessoas com doença falciforme tenham seu sangue tipado para os antígenos RhC / c, RhE / e, Kell, Duffy, Kidd e MNS antes da transfusão, porque muitas vezes requerem transfusões e podem se tornar sensíveis a eles antígenos se transfundidos com sangue incompatível. A fenotipagem estendida de glóbulos vermelhos também é recomendada para pessoas com talassemia beta . Os sistemas de grupos sanguíneos diferentes de ABO e Rh têm um risco relativamente pequeno de complicações quando o sangue é misturado, portanto, em emergências como hemorragia grave , a urgência da transfusão pode exceder a necessidade de testes de compatibilidade com outros sistemas de grupos sanguíneos (e potencialmente Rh também )
Triagem e identificação de anticorpos
Os anticorpos para a maioria dos antígenos do grupo sanguíneo, além dos do sistema ABO, se desenvolvem após a exposição a sangue incompatível. Esses anticorpos "inesperados" do grupo sanguíneo são encontrados apenas em 0,8–2% das pessoas; no entanto, os receptores de transfusões de sangue devem ser rastreados para esses anticorpos para prevenir reações transfusionais. A triagem de anticorpos também é realizada como parte do cuidado pré-natal , porque os anticorpos contra RhD e outros antígenos do grupo sanguíneo podem causar doença hemolítica do recém-nascido e porque as mães Rh-negativas que desenvolveram um anticorpo anti-RhD não são elegíveis para receber Rho (D ) imunoglobulina (Rhogam).
No procedimento de triagem de anticorpos, o plasma de um indivíduo é adicionado a um painel de dois ou três conjuntos de glóbulos vermelhos que foram escolhidos para expressar a maioria dos antígenos do grupo sanguíneo clinicamente significativos. Apenas as células do grupo O são usadas na triagem de anticorpos, caso contrário, as células reagiriam com os anticorpos do grupo sanguíneo ABO de ocorrência natural. A mistura de plasma e hemácias é incubada a 37 ° C e testada por meio do teste indireto de antiglobulina. Alguns protocolos de rastreio e identificação de anticorpos incorporam uma fase de teste após a incubação à temperatura ambiente, mas isto é frequentemente omitido porque a maioria dos anticorpos inesperados que reagem à temperatura ambiente são clinicamente insignificantes.
Aglutinação das células de triagem pelo plasma, com ou sem a adição de globulina anti-humana, indica que um anticorpo inesperado do grupo sanguíneo está presente. Se isso ocorrer, testes adicionais usando mais células (geralmente 10-11) são necessários para identificar o anticorpo. Ao examinar os perfis de antígenos dos glóbulos vermelhos com os quais o plasma da pessoa reage, é possível determinar a identidade do anticorpo. Um "autocontrole", em que o plasma do indivíduo é testado contra seus próprios glóbulos vermelhos, é incluído para determinar se a aglutinação é devida a um aloanticorpo (um anticorpo contra um antígeno estranho), um autoanticorpo (um anticorpo contra os próprios antígenos), ou outra substância interferente.
A imagem acima mostra a interpretação de um painel de anticorpos usado em sorologia para detectar anticorpos para os antígenos de grupo sanguíneo mais relevantes. Cada linha representa glóbulos vermelhos de "referência" ou "controle" de doadores que têm composições de antígeno conhecidas e são do grupo O de ABO . A + significa que o antígeno está presente nas hemácias de referência e 0 significa que está ausente; nt significa "não testado". A coluna "resultado" à direita exibe a reatividade ao misturar glóbulos vermelhos de referência com plasma do paciente em 3 fases diferentes: temperatura ambiente, 37 ° C e AHG (com globulina anti-humana, pelo teste indireto de antiglobulina ).
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Etapa 1 ; Anotado em azul: começando a excluir antígenos sem reação em todas as 3 fases; olhando para a primeira linha de células de referência sem reação (0 na coluna à direita, neste caso doador de células 2), e excluindo (aqui marcado por X) cada antígeno presente onde o outro par é praticamente inexistente (como para D) ou 0 (a presença é homozigótica, neste caso homozigótica c).
Quando ambos os pares são + (casos heterozigotos), eles são excluídos (aqui marcados por X), exceto para antígenos C / c, E / e, Duffy, Kidd e MNS (onde os anticorpos do paciente ainda podem reagir às células do sangue com expressão do antígeno homozigoto, porque a expressão homozigótica resulta em uma dosagem maior do antígeno). Assim, neste caso, E / e não é excluído nesta linha, enquanto K / k é, assim como Js b (independentemente do que Js a teria mostrado). - Etapa 2 : Anotado em marrom: Ir para a próxima linha de células de referência com uma reação negativa (neste caso, doador de células 4) e repetir para cada tipo de antígeno que ainda não foi excluído.
- Etapa 3 : anotado em roxo. Repetir o mesmo para cada linha de célula de referência com reação negativa.
- Etapa 4 : Descontar antígenos que estavam ausentes em todos ou quase todos os casos reativos (aqui marcados com \). Esses costumam ser antígenos com baixa prevalência e, embora haja a possibilidade de tais anticorpos serem produzidos, geralmente não são o tipo responsável pela reatividade em questão.
- Etapa 5 : Comparando os possíveis antígenos restantes para um culpado mais provável (neste caso Fy a ), e seletivamente excluindo antígenos diferenciais significativos, como com o tipo de célula de doador adicional mostrado que é conhecido por não conter Fy a, mas contém C e Jk a .
Neste caso, o painel de anticorpos mostra que os anticorpos anti-Fy a estão presentes. Isso indica que o sangue de um doador com tipagem negativa para o antígeno Fy a deve ser usado. Ainda assim, se uma correspondência cruzada subsequente mostrar reatividade, testes adicionais devem ser feitos contra antígenos previamente descontados (neste caso, potencialmente E, K, Kp a e / ou Lu a ).
| Substância Neutralizante | Antígeno cancelado |
|---|---|
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P 1 |
| Saliva | H, Le a |
| Leite materno | eu |
| Urina de porquinho da índia | Sd a |
Quando vários anticorpos estão presentes, ou quando um anticorpo é dirigido contra um antígeno de alta frequência, o procedimento de painel de anticorpos normal pode não fornecer uma identificação conclusiva. Nestes casos, a inibição da hemaglutinação pode ser usada, em que uma substância neutralizante cancela um antígeno específico. Alternativamente, o plasma pode ser incubado com células de perfis de antígenos conhecidos para remover um anticorpo específico (um processo denominado adsorção ); ou as células podem ser tratadas com enzimas como ficaína ou papaína, que inibem a reatividade de alguns anticorpos do grupo sanguíneo e aumentam outros. O efeito da ficaína e papaína nos principais sistemas de grupos sanguíneos é o seguinte:
- Aprimorado: ABO , Rh , Kidd , Lewis , P1 , Ii
- Destruído: Duffy (Fy a e Fy b ), Luterano , MNS
- Não afetado: Kell
Pessoas que tiveram um teste positivo para um anticorpo inesperado de grupo sanguíneo no passado podem não apresentar uma reação positiva nos testes subsequentes; no entanto, se o anticorpo for clinicamente significativo, eles devem ser transfundidos com sangue negativo para o antígeno, independentemente.
Emparelhamento
A prova cruzada, que é realizada rotineiramente antes de uma transfusão de sangue, envolve a adição do plasma sanguíneo do receptor a uma amostra de glóbulos vermelhos do doador. Se o sangue for incompatível, os anticorpos no plasma do receptor se ligarão aos antígenos dos glóbulos vermelhos do doador. Esta reação anticorpo-antígeno pode ser detectada através de aglomeração visível ou destruição dos glóbulos vermelhos, ou por reação com globulina anti-humana , após centrifugação.
Se o receptor da transfusão tiver uma triagem de anticorpos negativa e nenhum histórico de anticorpos, um crossmatch "spin imediato" é frequentemente realizado: os glóbulos vermelhos e o plasma são centrifugados imediatamente após a mistura como uma verificação final para incompatibilidade entre os tipos de sangue ABO. Se um anticorpo clinicamente significativo for detectado (ou foi no passado), ou se o spin crossmatch imediato demonstrar incompatibilidade, um "full" ou "IgG crossmatch" é realizado, que usa o teste de antiglobulina indireto para detectar incompatibilidade de grupo sanguíneo causada por IgG anticorpos. O procedimento de crossmatch de IgG é mais demorado do que o spin crossmatch imediato e, em alguns casos, pode levar mais de duas horas.
Os indivíduos com triagem de anticorpos negativa e sem histórico de anticorpos também podem ser submetidos a uma "prova cruzada eletrônica", desde que seus tipos ABO e Rh tenham sido determinados a partir da amostra de sangue atual e que os resultados de outro tipo ABO / Rh estejam registrados. Nesse caso, o tipo de sangue do receptor é simplesmente comparado ao do doador, sem a necessidade de teste sorológico. Em emergências, o sangue pode ser distribuído antes que a prova cruzada seja concluída.
Métodos
Métodos de tubo e lâmina
A tipagem sanguínea pode ser realizada usando tubos de ensaio, microplacas ou lâminas de tipagem sanguínea. O método do tubo envolve a mistura de uma suspensão de glóbulos vermelhos com anti-soros (ou plasma, para agrupamento reverso) em um tubo de ensaio. A mistura é centrifugada para separar as células do reagente e, em seguida, ressuspensa agitando suavemente o tubo. Se o antígeno de interesse estiver presente, as hemácias se aglutinam, formando uma massa sólida no tubo. Se estiver ausente, os glóbulos vermelhos voltam à suspensão quando misturados. O método da microplaca é semelhante ao método do tubo, exceto que em vez de usar tubos de ensaio individuais, a tipagem sanguínea é realizada em uma placa contendo dezenas de poços, permitindo a realização de vários testes ao mesmo tempo. As reações de aglutinação são lidas após a placa ser centrifugada.
A triagem e identificação de anticorpos também podem ser realizadas pelo método do tubo. Nesse procedimento, o plasma e as hemácias são misturados em um tubo contendo um meio que potencializa as reações de aglutinação, como a solução salina de baixa força iônica (LISS). Os tubos são incubados à temperatura corporal por um período de tempo definido, depois centrifugados e examinados para aglutinação ou hemólise; primeiro imediatamente após o período de incubação e, em seguida, após a lavagem e adição do reagente de globulina anti-humana. A combinação cruzada, da mesma forma, pode ser realizada pelo método do tubo; as reações são lidas imediatamente após a centrifugação na prova cruzada de spin imediato ou após a incubação e adição de AHG no procedimento de prova cruzada completa.
O método de lâmina para tipagem sanguínea envolve misturar uma gota de sangue com uma gota de anti-soros em uma lâmina. A lâmina é inclinada para misturar as células e os reagentes e, em seguida, observada para aglutinação, o que indica um resultado positivo. Este método é normalmente usado em áreas com poucos recursos ou situações de emergência; caso contrário, métodos alternativos são preferidos.
Aglutinação de coluna
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As técnicas de aglutinação em coluna para teste de compatibilidade sanguínea (às vezes chamado de "teste de gel") usam cartões contendo colunas de gel de dextrano - poliacrilamida . Os cartões concebidos para tipagem sanguínea contêm reagentes de tipagem sanguínea pré-dispensados para agrupamento direto e poços contendo apenas uma solução tampão , à qual são adicionados glóbulos vermelhos reagentes e plasma, para agrupamento reverso. A triagem de anticorpos e a comparação cruzada também podem ser realizadas por aglutinação em coluna, em que cartões contendo reagente de globulina anti-humana são usados. Os cartões de gel são centrifugados (às vezes após a incubação, dependendo do teste), durante o qual os aglutinados de glóbulos vermelhos ficam presos no topo da coluna porque são muito grandes para migrar através do gel. As células que não se aglutinaram se acumulam na parte inferior. Portanto, uma linha de glóbulos vermelhos no topo da coluna indica um resultado positivo. A força das reações positivas é pontuada de 1+ a 4+ dependendo da distância que as células percorreram através do gel. O teste de gel tem vantagens sobre os métodos manuais porque elimina a variabilidade associada à ressuspensão manual das células e os cartões podem ser mantidos como um registro do teste. O método de aglutinação em coluna é usado por alguns analisadores automáticos para realizar a tipagem sanguínea automaticamente. Esses analisadores pipetam células vermelhas do sangue e plasma em cartões de gel, centrifugam e fazem a varredura e leem as reações de aglutinação para determinar o tipo de sangue.
Ensaio de fase sólida
Os ensaios de fase sólida (às vezes chamados de método de "captura de antígeno") usam antígenos reagentes ou anticorpos fixados em uma superfície (geralmente uma microplaca). Os poços da microplaca revestidos com reagentes anti-A, -B e -D são usados para agrupamento direto. A amostra de teste é adicionada e a microplaca é centrifugada; em uma reação positiva, os glóbulos vermelhos aderem à superfície do poço. Alguns analisadores automatizados usam ensaios de fase sólida para tipagem sanguínea.
Genotipagem
O teste genético pode ser usado para determinar o tipo de sangue de uma pessoa em certas situações em que o teste sorológico é insuficiente. Por exemplo, se uma pessoa recebeu uma transfusão de grandes volumes de sangue de um doador, os resultados do teste sorológico refletirão os antígenos nas células do doador e não o tipo de sangue real da pessoa. Indivíduos que produzem anticorpos contra seus próprios glóbulos vermelhos ou que são tratados com certos medicamentos podem apresentar reações de aglutinação espúrias em testes sorológicos, portanto, a genotipagem pode ser necessária para determinar seu tipo sanguíneo com precisão. O teste genético é necessário para a tipagem de antígenos de glóbulos vermelhos para os quais não há anti-soros comerciais disponíveis.
A AABB recomenda a genotipagem do antígeno RhD para mulheres com fenótipos D sorológicos fracos que têm potencial para ter filhos. Isso ocorre porque algumas pessoas com fenótipos D fracos podem produzir anticorpos contra o antígeno RhD, que pode causar doença hemolítica no recém-nascido, enquanto outras não. A genotipagem pode identificar o tipo específico de antígeno D fraco, que determina o potencial da pessoa em produzir anticorpos, evitando assim o tratamento desnecessário com imunoglobulina Rho (D) . A genotipagem é preferível ao teste sorológico para pessoas com doença falciforme, porque é mais precisa para certos antígenos e pode identificar antígenos que não podem ser detectados por métodos sorológicos.
A genotipagem também é usada em testes pré-natais para doença hemolítica do recém-nascido. Quando uma mulher grávida tem um anticorpo de grupo sanguíneo que pode causar HDN, o feto pode ser digitado para o antígeno relevante para determinar se ele está em risco de desenvolver a doença. Como é impraticável retirar sangue do feto, o tipo de sangue é determinado usando uma amostra de amniocentese ou DNA fetal livre de células isolado do sangue da mãe. O pai também pode ser genotipado para prever o risco de doença hemolítica do recém-nascido, porque se o pai for homozigoto para o antígeno relevante (ou seja, ter duas cópias do gene), o bebê será positivo para o antígeno e, portanto, em risco de desenvolver a doença. Se o pai for heterozigoto (possuindo apenas uma cópia), o bebê tem apenas 50% de chance de ser positivo para o antígeno.
Limitações
Discrepâncias ABO
Na tipagem ABO, os resultados do agrupamento direto e reverso devem sempre corresponder entre si. Uma diferença inesperada entre os dois resultados é denominada discrepância ABO e deve ser resolvida antes que o tipo de sangue da pessoa seja relatado.
Agrupamento direto
Reações fracas no agrupamento avançado podem ocorrer em pessoas que pertencem a certos subgrupos ABO - tipos de sangue variantes caracterizados por expressão diminuída dos antígenos A ou B ou mudanças em sua estrutura. A expressão enfraquecida dos antígenos ABO também pode ocorrer na leucemia e no linfoma de Hodgkin . Reações fracas no agrupamento direto podem ser fortalecidas incubando o sangue e a mistura de reagentes em temperatura ambiente ou 4 ° C (39 ° F), ou usando certas enzimas para intensificar as reações antígeno-anticorpo.
Ocasionalmente, duas populações de glóbulos vermelhos são aparentes após a reação com os anti-soros de tipagem sanguínea. Algumas das hemácias são aglutinadas, enquanto outras não, dificultando a interpretação do resultado. Isso é chamado de reação de campo misto e pode ocorrer se alguém recebeu recentemente uma transfusão de sangue com um tipo de sangue diferente (como em um paciente tipo A recebendo sangue tipo O), se recebeu um transplante de medula óssea ou células-tronco de alguém com um tipo de sangue diferente ou em pacientes com certos subgrupos ABO, como A 3 . A investigação do histórico médico da pessoa pode esclarecer a causa da reação de campo misto.
Pessoas com doença da aglutinina fria produzem anticorpos contra seus próprios glóbulos vermelhos que fazem com que se aglutinem espontaneamente em temperatura ambiente, levando a reações falso-positivas no agrupamento direto. As aglutininas frias geralmente podem ser desativadas aquecendo a amostra a 37 ° C (99 ° F) e lavando os glóbulos vermelhos com solução salina. Se isso não for eficaz, o ditiotreitol pode ser usado para destruir os anticorpos.
As amostras de sangue do cordão umbilical podem estar contaminadas com geleia de Wharton , uma substância viscosa que pode fazer com que os glóbulos vermelhos se colem, simulando aglutinação. A geleia de Wharton pode ser removida com a lavagem completa dos glóbulos vermelhos.
Em um fenômeno raro conhecido como "antígeno B adquirido", um paciente cujo verdadeiro tipo de sangue é A pode apresentar um resultado positivo fraco para B no agrupamento direto. Essa condição, que está associada a doenças gastrointestinais, como câncer de cólon e obstrução intestinal , resulta da conversão do antígeno A em uma estrutura que mimetiza o antígeno B por enzimas bacterianas. Ao contrário do antígeno B verdadeiro, o antígeno B adquirido não reage com reagentes dentro de uma determinada faixa de pH.
Agrupamento reverso
Bebês com menos de 3 a 6 meses de idade apresentam reações ausentes ou fracas no agrupamento reverso porque produzem níveis muito baixos de anticorpos ABO. Portanto, o agrupamento reverso geralmente não é realizado para essa faixa etária. Os idosos também podem apresentar diminuição da produção de anticorpos, assim como as pessoas com hipogamaglobulinemia . As reações fracas podem ser fortalecidas permitindo que o plasma e os glóbulos vermelhos incubem à temperatura ambiente por 15 a 30 minutos e, se isso não for eficaz, eles podem ser incubados a 4 ° C (39 ° F).
Aproximadamente 20% dos indivíduos com sangue tipo A ou AB pertencem a um subgrupo de A, denominado A 2 , enquanto o subgrupo mais comum, abrangendo aproximadamente 80% dos indivíduos, é denominado A 1 . Devido a pequenas diferenças na estrutura dos antígenos A 1 e A 2 , alguns indivíduos no subgrupo A 2 podem produzir um anticorpo contra A 1 . Portanto, esses indivíduos irão digitar como A ou AB no agrupamento direto, mas exibirão uma reação positiva inesperada com as hemácias do tipo A 1 no agrupamento reverso. A discrepância pode ser resolvida testando os glóbulos vermelhos da pessoa com um reagente anti-A 1 , que dará um resultado negativo se o paciente pertencer ao subgrupo A 2 . Os anticorpos anti-A 1 são considerados clinicamente insignificantes, a menos que reajam a 37 ° C (99 ° F). Outros subgrupos de A existem, bem como subgrupos de B, mas raramente são encontrados.
Se níveis elevados de proteína estiverem presentes no plasma de uma pessoa, um fenômeno conhecido como rouleaux pode ocorrer quando o plasma é adicionado às células reagentes. Rouleaux faz com que os glóbulos vermelhos se acumulem, o que pode simular aglutinação, causando um resultado falso positivo no agrupamento reverso. Isso pode ser evitado removendo o plasma, substituindo-o por solução salina e centrifugando novamente o tubo. Rouleaux irá desaparecer assim que o plasma for substituído por solução salina, mas a aglutinação verdadeira irá persistir.
Anticorpos para antígenos de grupos sanguíneos diferentes de A e B podem reagir com as células reagentes usadas no agrupamento reverso. Se um autoanticorpo com reação ao frio estiver presente, o resultado falso positivo pode ser resolvido aquecendo a amostra a 37 ° C (99 ° F). Se o resultado for causado por um aloanticorpo, uma triagem de anticorpo pode ser realizada para identificar o anticorpo, e o agrupamento reverso pode ser realizado usando amostras que não possuem o antígeno relevante.
Fenótipo D fraco
Aproximadamente 0,2 a 1% das pessoas têm um fenótipo "D fraco", o que significa que são positivas para o antígeno RhD, mas exibem reações fracas ou negativas com alguns reagentes anti-RhD devido à diminuição da expressão do antígeno ou variantes atípicas da estrutura do antígeno. Se o teste sorológico de rotina para RhD resultar em uma pontuação de 2+ ou menos, o teste de antiglobulina pode ser usado para demonstrar a presença de RhD. O teste de D fraco também é realizado em doadores de sangue que inicialmente digitam como RhD negativo. Historicamente, os doadores de sangue com D fraco eram tratados como Rh positivo e os pacientes com D fraco eram tratados como Rh negativo, a fim de evitar a exposição potencial a sangue incompatível. A genotipagem é cada vez mais usada para determinar a base molecular dos fenótipos D fraco, pois isso determina se os indivíduos com D fraco podem ou não produzir anticorpos contra RhD ou sensibilizar outros para o antígeno RhD.
Sensibilização de anticorpos de eritrócitos
O teste indireto de antiglobulina , que é usado para teste de D fraco e tipagem de alguns antígenos de glóbulos vermelhos, detecta a ligação de IgG aos glóbulos vermelhos. Se a IgG se liga aos glóbulos vermelhos in vivo , como pode ocorrer na anemia hemolítica autoimune , doença hemolítica do recém-nascido e reações transfusionais, o teste indireto de antiglobulina sempre dará resultado positivo, independentemente da presença do antígeno relevante. Um teste direto de antiglobulina pode ser realizado para demonstrar que a reação positiva se deve à sensibilização das hemácias.
Outros testes de pré-transfusão
Alguns grupos de pessoas têm necessidades de transfusão especializadas. Fetos, bebês com muito baixo peso ao nascer e pessoas imunocomprometidas estão em risco de desenvolver infecção grave com citomegalovírus (CMV), um patógeno oportunista para o qual aproximadamente 50% dos doadores de sangue testam positivo - e podem ser transfundidos com sangue negativo para CMV para Prevenir a infecção. Aqueles que correm o risco de desenvolver a doença do enxerto contra o hospedeiro , como os receptores de transplante de medula óssea , recebem sangue que foi irradiado para inativar os linfócitos T responsáveis por essa reação. Pessoas que tiveram reações alérgicas graves a transfusões de sangue no passado podem ser transfundidas com sangue que foi "lavado" para remover o plasma. O histórico do paciente também é examinado para ver se ele identificou previamente anticorpos e quaisquer outras anomalias sorológicas.
Um teste de antiglobulina direto (teste de Coombs ) também é realizado como parte da investigação de anticorpos.
O sangue do doador é geralmente examinado para infecções transmitidas por transfusão , como o HIV . Em 2018, a Organização Mundial da Saúde informou que quase 100% das doações de sangue em países de renda alta e média alta foram submetidas a rastreamento de doenças infecciosas, mas os números para países de renda média baixa e baixa foram 82% e 80,3 % respectivamente.
História
Em 1901, Karl Landsteiner publicou os resultados de um experimento no qual misturou soro e glóbulos vermelhos de cinco diferentes doadores humanos. Ele observou que o soro de uma pessoa nunca aglutinava seus próprios glóbulos vermelhos, mas podia aglutinar o de outras pessoas e, com base nas reações de aglutinação, os glóbulos vermelhos podiam ser classificados em três grupos: grupo A, grupo B e grupo C. Grupo C, que consistia em glóbulos vermelhos que não reagiam com o plasma de nenhuma pessoa, mais tarde seria conhecido como grupo O. Um quarto grupo, agora conhecido como AB, foi descrito pelos colegas de Landsteiner em 1902. Esse experimento foi o primeiro exemplo de tipagem sanguínea.
Em 1945, Robin Coombs , AE Mourant e RR Race publicaram uma descrição do teste de antiglobulina (também conhecido como teste de Coombs). Pesquisas anteriores sobre anticorpos de grupos sanguíneos haviam documentado a presença dos chamados anticorpos "bloqueadores" ou "incompletos": anticorpos que ocupavam sítios de antígenos, evitando que outros anticorpos se ligassem, mas não causavam a aglutinação dos glóbulos vermelhos. Coombs e seus colegas desenvolveram um método para demonstrar facilmente a presença desses anticorpos. Eles injetaram imunoglobulinas humanas em coelhos, o que os levou a produzir um anticorpo anti-globulina humana . A globulina anti-humana pode se ligar a anticorpos já aderidos aos glóbulos vermelhos e fazer com que se aglutinem. A invenção do teste de antiglobulina levou à descoberta de muito mais antígenos de grupos sanguíneos. No início da década de 1950, as empresas começaram a produzir anti-soros comerciais para testes de antígenos especiais.